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lxh502976898

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白诱导表达

我最近构建了表达载体,酶切鉴定也合格,加IPTG诱导后没有又到处目的蛋白条带,急需帮助。。。。。
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
15楼: Originally posted by lxh502976898 at 2012-10-20 14:08:29
大哥 你能不能一次性说完  出现不表达的可能性原因,...

不同物种的密码子偏好不同。比如说人或者植物的密码子使用和原核生物的不大一样。你要把目的基因按照菌的密码子翻译,看看和序列与原来的氨基酸序列是否一样。而且,如果使用了菌稀有的密码子,表达效率会很差。
16楼2012-10-21 02:15:16
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yongbo_liang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你换个载体或是表达菌株尝试一下。
应该是两者不相容
2楼2012-10-17 11:26:39
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xiayongxiu

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-17 14:51:08
首先,确认你的表达载体的启动子,看是否是通过IPTG诱导的;其次是筛选诱导培养的条件,包括IPTG的量、诱导温度、转速等等;还有就是诱导蛋白纯化过程了,有的蛋白是以包涵体的形式存在,所以还得注意了。
一切都要靠自己努力
3楼2012-10-17 11:31:37
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lxh502976898

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xiayongxiu at 2012-10-17 11:31:37
首先,确认你的表达载体的启动子,看是否是通过IPTG诱导的;其次是筛选诱导培养的条件,包括IPTG的量、诱导温度、转速等等;还有就是诱导蛋白纯化过程了,有的蛋白是以包涵体的形式存在,所以还得注意了。

能确定是IPTG诱导,我是打算先诱导一下,确定能否能表达之后再优化条件,
4楼2012-10-17 15:31:20
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