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zishilanxuan金虫 (小有名气)
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关于克隆技术——pcr产物测序问题
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| 各位大侠，我想请问一下，我从一种菌中P出来一条带，然后我进行胶回收，连接T载体，将连接产物转到感受态DH5α中，通过蓝白斑筛选，挑取白斑进行培养，能P出我胶回收的带，然后我把它送去测序，但测序结果不是我要的目的基因，而且测序结果在我菌的全序列里也没有匹配的，我想问一下，这是哪里出了问题啊？正常即使不是我的目的基因，是不是测出来的在我的全序列里也应该能有匹配的啊？希望大家能够帮我看看问题出在哪? |
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2楼2012-10-16 16:50:29
liuguilin 
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实验不一样吧，我做的是基因步移，不过我的也是出现同种现象，而且我的特异性引物也能找到，但是就是找不到匹配的。我原来猜测是连接问题，前面连接问题大片段不行，后面换了酶后连接正常，但是今天出来测序结果还是不是自己正确的条带，目前也在纠结。PCR产物送出去测序要能保证条带单一，而且PCR产物测序也不是很准确，我也是在纠结这个问题，不好意思了，没有解决你的问题。我也是想解决这个问题。目前猜测是我的引物的问题。。。 |
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zishilanxuan10楼2012-10-17 14:55:45
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