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zishilanxuan

金虫 (小有名气)

[求助] 关于克隆技术——pcr产物测序问题

各位大侠,我想请问一下,我从一种菌中P出来一条带,然后我进行胶回收,连接T载体,将连接产物转到感受态DH5α中,通过蓝白斑筛选,挑取白斑进行培养,能P出我胶回收的带,然后我把它送去测序,但测序结果不是我要的目的基因,而且测序结果在我菌的全序列里也没有匹配的,我想问一下,这是哪里出了问题啊?正常即使不是我的目的基因,是不是测出来的在我的全序列里也应该能有匹配的啊?希望大家能够帮我看看问题出在哪?
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yasmineross

铁虫 (小有名气)

是不是测序公司发错结果了?你的引物序列在测序结果中能找到吗?
8楼2012-10-17 13:40:13
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yasmineross

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by zishilanxuan at 2012-10-17 15:27:30
我没找到...

如果你的PCR产物是很单一且浓度高,纯化一下测个浓度100ng/ul左右送测序没有问题,2000的片段两个反应测不通,可以在中间加一条引物测一个反应。

或者你再送2个克隆去测序?
14楼2012-10-18 11:15:35
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