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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于卫星菌落
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summergca

铜虫 (初入文坛)

[求助] 关于卫星菌落

最近在做转化，感受态用的是Top 10，质粒a是Amp抗性（浓度100ug/ul），在37℃，过夜培养，大概13小时左右，有卫星菌落；
   后来增加Amp浓度，150ug/ul，同样培养条件，还是有卫星菌落生长；
   用pUC18、pUC19转化的时候，没有卫星菌落
   Amp是索来宝的，质粒a是老师自己构建的，他说是抗生素问题……
     大神们帮我分析分析吧~
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1楼2012-10-15 09:54:59
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
summergca: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-11-30 17:14:17
你这Amp浓度也太高了吧，终浓度100ug/ul？终浓度一般都100ug/ml的吧，你这别说卫星菌落了，13小时估计一颗菌都不会长吧，你Amp肯定失效了，充沛吧，我100ug/ml终浓度的培养基，37℃24h都不长卫星菌落.
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summergca
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
2楼2012-10-15 10:13:33
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gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你这个浓度。。。。是打错了吧。。。一般都是采用100mg/ml配AMP，然后1:1000的加入培养基。

Amp抗生素就是有这个缺点，我们实验室的Amp也有这个毛病，它比较不稳定，实效短，易降解。
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summergca
3楼2012-10-15 10:55:17
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summergca

铜虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by Marado at 2012-10-15 10:13:33
你这Amp浓度也太高了吧，终浓度100ug/ul？终浓度一般都100ug/ml的吧，你这别说卫星菌落了，13小时估计一颗菌都不会长吧，你Amp肯定失效了，充沛吧，我100ug/ml终浓度的培养基，37℃24h都不长卫星菌落.

不好意思，打错了，终浓度是100ug/ml，
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4楼2012-10-15 11:06:18
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summergca

铜虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by gelois at 2012-10-15 10:55:17
你这个浓度。。。。是打错了吧。。。一般都是采用100mg/ml配AMP，然后1:1000的加入培养基。

Amp抗生素就是有这个缺点，我们实验室的Amp也有这个毛病，它比较不稳定，实效短，易降解。

嗯，是打错了~
但是其他质粒转进去，同样的培养条件，并没有长单菌落啊
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5楼2012-10-15 11:08:01
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

卫星菌落都起来了，单克隆菌落应该已经比较明显了吧，如果你的菌在平板长得快的话，可以考虑8小时就挑单菌落，我的菌不行，我的12小时都不太明显……
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6楼2012-10-15 11:12:10
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summergca

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Marado at 2012-10-15 11:12:10
卫星菌落都起来了，单克隆菌落应该已经比较明显了吧，如果你的菌在平板长得快的话，可以考虑8小时就挑单菌落，我的菌不行，我的12小时都不太明显……

单克隆比卫星菌落大一点，可以挑起来，在LB中生长时间就是特别慢
上次转pUC18、pUC19到Top，挑单菌落，15ml的管子，接了7ml，摇了二十来个小时，菌浓度还是比较低

？Top10本身生长速度也不是这么慢
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7楼2012-10-15 11:19:07
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
7楼: Originally posted by summergca at 2012-10-15 11:19:07
单克隆比卫星菌落大一点，可以挑起来，在LB中生长时间就是特别慢
上次转pUC18、pUC19到Top，挑单菌落，15ml的管子，接了7ml，摇了二十来个小时，菌浓度还是比较低

？Top10本身生长速度也不是这么慢...

15ml的管子最好接2-3ml，7ml太多了，进气不足，菌长得慢。
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8楼2012-10-15 13:26:37
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-16 13:45:14
如果构建的载体没有问题，出现卫星菌落一般考虑一下几个方面：一是抗生素出了问题；二是操作出了问题。抗生素放置时间过长或者温度过高，也可能是紫外线灯因素影响，会出现失效的可能。在加氨苄的平板上涂布菌液时，可能由于氨苄浓度太低或者局部菌液太多，出现卫星菌落情况。如果以上所有问题都已经排除还是出现卫星菌落，建议挑去卫星菌落中间较大的菌落，成功率也还是比较高的。
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9楼2012-10-16 08:28:50
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xl0071334

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
Amp通常情况是不会出现问题。出现卫星菌落对Amp抗性的菌是很正常的情况，是由Amp的抗性原理决定，建议楼主看看pET载体使用手册中Amp的注意事项。
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10楼2012-10-16 20:19:56
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