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summergca

铜虫 (初入文坛)

[求助] 关于卫星菌落

最近在做转化,感受态用的是Top 10,质粒a是Amp抗性(浓度100ug/ul),在37℃,过夜培养,大概13小时左右,有卫星菌落;
   后来增加Amp浓度,150ug/ul,同样培养条件,还是有卫星菌落生长;
   用pUC18、pUC19转化的时候,没有卫星菌落
   Amp是索来宝的,质粒a是老师自己构建的,他说是抗生素问题……
     大神们帮我分析分析吧~
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-16 13:45:14
如果构建的载体没有问题,出现卫星菌落一般考虑一下几个方面:一是抗生素出了问题;二是操作出了问题。抗生素放置时间过长或者温度过高,也可能是紫外线灯因素影响,会出现失效的可能。在加氨苄的平板上涂布菌液时,可能由于氨苄浓度太低或者局部菌液太多,出现卫星菌落情况。如果以上所有问题都已经排除还是出现卫星菌落,建议挑去卫星菌落中间较大的菌落,成功率也还是比较高的。
9楼2012-10-16 08:28:50
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
summergca: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-11-30 17:14:17
你这Amp浓度也太高了吧,终浓度100ug/ul?终浓度一般都100ug/ml的吧,你这别说卫星菌落了,13小时估计一颗菌都不会长吧,你Amp肯定失效了,充沛吧,我100ug/ml终浓度的培养基,37℃24h都不长卫星菌落.

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
2楼2012-10-15 10:13:33
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gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你这个浓度。。。。是打错了吧。。。一般都是采用100mg/ml配AMP,然后1:1000的加入培养基。

Amp抗生素就是有这个缺点,我们实验室的Amp也有这个毛病,它比较不稳定,实效短,易降解。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2012-10-15 10:55:17
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summergca

铜虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by Marado at 2012-10-15 10:13:33
你这Amp浓度也太高了吧,终浓度100ug/ul?终浓度一般都100ug/ml的吧,你这别说卫星菌落了,13小时估计一颗菌都不会长吧,你Amp肯定失效了,充沛吧,我100ug/ml终浓度的培养基,37℃24h都不长卫星菌落.

不好意思,打错了,终浓度是100ug/ml,
4楼2012-10-15 11:06:18
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