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summergca

铜虫 (初入文坛)

[求助] 关于卫星菌落

最近在做转化,感受态用的是Top 10,质粒a是Amp抗性(浓度100ug/ul),在37℃,过夜培养,大概13小时左右,有卫星菌落;
   后来增加Amp浓度,150ug/ul,同样培养条件,还是有卫星菌落生长;
   用pUC18、pUC19转化的时候,没有卫星菌落
   Amp是索来宝的,质粒a是老师自己构建的,他说是抗生素问题……
     大神们帮我分析分析吧~
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
7楼: Originally posted by summergca at 2012-10-15 11:19:07
单克隆比卫星菌落大一点,可以挑起来,在LB中生长时间就是特别慢
上次转pUC18、pUC19到Top,挑单菌落,15ml的管子,接了7ml,摇了二十来个小时,菌浓度还是比较低

?Top10本身生长速度也不是这么慢...

15ml的管子最好接2-3ml,7ml太多了,进气不足,菌长得慢。
8楼2012-10-15 13:26:37
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
summergca: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-11-30 17:14:17
你这Amp浓度也太高了吧,终浓度100ug/ul?终浓度一般都100ug/ml的吧,你这别说卫星菌落了,13小时估计一颗菌都不会长吧,你Amp肯定失效了,充沛吧,我100ug/ml终浓度的培养基,37℃24h都不长卫星菌落.

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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
2楼2012-10-15 10:13:33
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gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你这个浓度。。。。是打错了吧。。。一般都是采用100mg/ml配AMP,然后1:1000的加入培养基。

Amp抗生素就是有这个缺点,我们实验室的Amp也有这个毛病,它比较不稳定,实效短,易降解。

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3楼2012-10-15 10:55:17
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summergca

铜虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by Marado at 2012-10-15 10:13:33
你这Amp浓度也太高了吧,终浓度100ug/ul?终浓度一般都100ug/ml的吧,你这别说卫星菌落了,13小时估计一颗菌都不会长吧,你Amp肯定失效了,充沛吧,我100ug/ml终浓度的培养基,37℃24h都不长卫星菌落.

不好意思,打错了,终浓度是100ug/ml,
4楼2012-10-15 11:06:18
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