24小时热门版块排行榜    

查看: 2391  |  回复: 16
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

水墨蓝

铁虫 (小有名气)

[求助] 如何根据保守序列将基因片段克隆出来

各位大侠:
    本人最近在做一个酶的PCR,不知道酶的氨基酸序列,但是根据得到的一些数据,我们推测为普鲁兰酶,并根据这个酶的保守序列设计了一些兼并引物,想得到一些核酸序列然后进行RACE以得到全基因序列,问题是第一步PCR就没进展,一直P不出来,要不P出来的就是基因组上的一些东西,跟这个酶没一点儿关系,所以寻求大家的帮助,常做这方面的虫友们帮帮忙吧  不胜感激 O(∩_∩)O~
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

水墨蓝

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2012-10-09 08:53:54
保守位点引物,靠近3端的5个左右核酸不简并(绝对保守的核酸),引物5端简并

兼并引物的设计和PCR有什么好的方法吗?第一次做这方面的东西,好多不懂,呵呵
10楼2012-10-10 11:14:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

exon2002

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
根据该酶最具表达可能的组织和时间,取cDNA,RACE 。
2楼2012-10-08 07:06:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
看天: 金币+2, 鼓励一下 2012-10-12 14:38:06
用什么来作为模板的?表达量越高的组织得率越高啊,或者根据上下游的基因来合成引起扩增,得到后再把不要的序列切掉~或者直接用引物拼接,把序列拼起来~
你的日子如何,你的力量也必如何!
4楼2012-10-08 16:06:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinpeng_6118

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
看天: 金币+2, 鼓励一下 2012-10-12 14:38:17
保守位点引物,靠近3端的5个左右核酸不简并(绝对保守的核酸),引物5端简并
人生百态原为海,看破红尘方为岸!
5楼2012-10-09 08:53:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[教师之家] 导师吐槽:我怎么摊上了这么个极品研究生! +6 苏东坡二世 2026-08-23 6/300 2026-08-27 13:57 by zhangjianl
[基金申请] 青基如何破局 +3 lyz123lyz 2026-08-27 4/200 2026-08-27 13:08 by kulium
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +5 Kittylucky 2026-08-27 5/250 2026-08-27 12:10 by 姜太公烤鱼
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +9 炎黄贵胄 2026-08-22 10/500 2026-08-26 15:40 by semaglutide
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +4 yuleib84 2026-08-26 5/250 2026-08-26 13:40 by yuleib84
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
信息提示
请填处理意见