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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何设计引物扩增片段？做克隆的
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review

银虫 (著名写手)

[求助] 如何设计引物扩增片段？做克隆的

已知 cdna序列和cds序列。
想设计引物：pcr扩增片段---回收片段，加A---与载体连接----转化--提质粒等
请问如何设计引物？是不是还要找到cds的  起始密码  终止密码之类？
谁能详细告诉我？初学者的困惑很痛苦啊
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交流
1楼 2012-09-29 13:42:13
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flyde1234

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-01 20:02:26
楼主可以去借一本关于PCR方面的书，看看就知道怎么设计了，其次就是注意，如果用的酶是Taq，pcr后纯化回收可以直接连T载体，如果用的是pfu酶的话，需要加一步A的反应，因为pfu酶不会在pcr产物末端加A
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我相信
10楼2012-09-30 17:52:12
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xw19880905

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-01 20:01:18
review: 金币+2, 谢谢！ 2012-10-08 13:13:23
这个没什么特别的呀，不需要起始密码终止密码子，你的上下游引物就是起始终止的作用，你要注意的是你设计的那段扩增片段是不是特异的，就按普通pcr引物设计一样设计引物
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2楼2012-09-29 15:20:05
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baby1987

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
review: 金币+2, 谢谢！ 2012-10-08 13:13:36
学习一下那个DNAman软件，primer5等专业引物设计软件，挺好用的。
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加油。
3楼2012-09-29 15:28:58
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-01 20:01:38
review: 金币+2, 谢谢！ 2012-10-08 13:13:55
是用sdna序列就可以了，加A需使用还有加A酶功能的dna扩增酶，有些酶扩增出来是不加A的，另外扩增后你可以直接连接到表达载体上就不需要加A了，另外起始密码和终止密码你一般最好含在里面，因为有些载体是不含有atg启动子和终止密码子的，但大多都是含有的，你带上了也不影响，所以最好带着。
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生物化学与分子生物学
4楼2012-09-29 15:49:21
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