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review银虫 (著名写手)
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[求助]
如何设计引物扩增片段？做克隆的
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已知 cdna序列和cds序列。 想设计引物：pcr扩增片段---回收片段，加A---与载体连接----转化--提质粒等 请问如何设计引物？是不是还要找到cds的 起始密码 终止密码之类？ 谁能详细告诉我？初学者的困惑很痛苦啊 |
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mamadexiao
木虫 (正式写手)
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- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
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review: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 你的回复很给力！其实我自己还不怎么清楚 所以问得也不好 明白了再问 2012-10-08 13:11:21
review: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 你的回复很给力！其实我自己还不怎么清楚 所以问得也不好 明白了再问 2012-10-08 13:11:21
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简单的很 首先，分析下你要用的质粒，在这个质粒可以插入的多克隆位点中找到你们实验室用的比较多的几个酶 然后再NCBI里把你的基因序列搞出来，要用CDS区的 一般都写着呢，CDS是编码片段，一般就是从ATG 开始的 然后，把你的序列用PRIMER5或者OLIGO7分析下，看看里面的限制性酶切位点都有哪些，这些位点以外的限制性内切酶，就是你可以选择的 看看有没有你们实验室常用的 限制性酶切位点+上/下游引物 如果你的是那种T载体 就更简单了 用能加A的聚合酶，直接扩 当然引物也得包括你的基因的CDS区 |
12楼2012-10-05 21:23:54