24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 3656  |  回复: 9

rinp

木虫 (正式写手)

[求助] 含有咪唑的蛋白溶液用什么方法定量

请问各位用含有咪唑的纯化蛋白溶液能否用Bradford法定量,如果不能应该用什么方法定量呢?
如果能明确详细解答,帮上忙就送上10个BB!!
多谢!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

海到无边天做岸山登绝顶我为峰.博士学位就是鞋里的一粒米,不拿不舒服,拿了不能吃!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

青豆同学

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
rinp: 金币+1, 谢谢回复,但是透析一般耗时很长啊而且蛋白损失严重,测280就是针对个别氨基酸的,非常之不准吧~~ 2012-09-28 10:24:40
透析后再定不可以么?梯度稀释后用分光光度计测280也行,但是要抠出背景值
谢谢你给我信心与力量,我会努力!
2楼2012-09-27 21:33:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
rinp: 金币+1, 谢谢回复!买试剂盒这个比较不现实~ 2012-09-28 10:26:36
有钱的话买个试剂盒。我用过biorad RC DC protein assay,还不错。简单的说是用TCA沉淀后重新溶解后就和普通蛋白样品一样定量了。
3楼2012-09-28 06:42:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

青豆同学

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

透析时,一小时换一次Buffer,3小时就可以,你体积应该不会很大,不需要多少时间
谢谢你给我信心与力量,我会努力!
4楼2012-09-28 12:26:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-09-28 06:42:24
有钱的话买个试剂盒。我用过biorad RC DC protein assay,还不错。简单的说是用TCA沉淀后重新溶解后就和普通蛋白样品一样定量了。

你的Bradford不是买的kit吗?你有没有离心超滤管,milipore YM-3的离心超滤管。用10倍无咪唑的的溶液洗三次可以把浓度降到很低,测试的背景小,基本没有干扰了。
5楼2012-09-28 14:10:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

protein780

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-09-29 14:44:58
可以用,吸光值不同,但是这样要求你的蛋白必须非常纯,因为所有的试剂盒的原理都是buffer跟蛋白反应,这样定量出来的是总蛋白包括降解蛋白,微量的杂蛋白,而且步骤相对麻烦些,我觉得简单有又比较可靠的是将标准的BSA稀释成1mg/ml,2mg/ml...然后跟你的蛋白一块跑SDS-PAGE,我觉得这是定量目标蛋白的相对靠谱的,当然,可以不用BSA,最好用跟你的蛋白大小差不多的已定量的蛋白做Marker,比如有的蛋白280吸收比较准。
6楼2012-09-28 18:15:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-09-29 14:45:08
楼主大概是做的His-tag纯化吧。虽然不知道你洗脱液的咪唑浓度。反正一般的蛋白测定方法不能直接测,因为你直接测洗脱液就有很高的吸收。必须把咪唑浓度降下来。要简单的话,我觉得你做个丙酮沉淀或者甲醇沉淀什么的。
7楼2012-09-29 09:54:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qianshengguo

铜虫 (小有名气)

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-29 14:45:18
可以直接测。SDS电泳,将电泳图扫描或通过photoshop,数据分析计算得到累计密度,即蛋白溶度。用分光光度计测溶度偏差很大,尤其是咪唑、尿素等许多物质都对吸光值有影响,测得值一般偏大,有时候能偏差一倍(我自己曾经经历过)。
8楼2012-09-29 09:58:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kukusnoopy

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以用Bradford法定量。595nm咪唑吸收可以忽略不计。但是咪唑在紫外会有吸收。
9楼2012-09-29 14:56:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杜小康

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 青豆同学 at 2012-09-28 12:26:29
透析时,一小时换一次Buffer,3小时就可以,你体积应该不会很大,不需要多少时间

请问buffer用什么?蒸馏水可以吗

发自小木虫IOS客户端
10楼2017-09-13 17:00:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 rinp 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 339求调剂 +4 烤麦芽 2026-03-27 5/250 2026-03-27 13:23 by 752105528
[考研] 329求调剂 +4 星野? 2026-03-26 4/200 2026-03-27 12:00 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿211,335分,0856,求调剂院校和导师 +4 倾____萧 2026-03-27 5/250 2026-03-27 11:52 by zhshch
[考研] 食品工程专硕求调剂 +3 小张zxy张 2026-03-26 3/150 2026-03-27 01:14 by dgnhs
[考研] 调剂求收留 +7 果然有我 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:26 by wxiongid
[考研] 349求调剂 +4 李木子啊哈哈 2026-03-25 4/200 2026-03-26 22:49 by fmesaito
[考研] 07化学280分求调剂 +8 722865 2026-03-23 8/400 2026-03-26 20:00 by 不吃魚的貓
[考研] 材料调剂 5+4 想要一壶桃花水 2026-03-25 10/500 2026-03-26 19:56 by 不吃魚的貓
[考研] 求调剂 +8 Auroracx 2026-03-22 8/400 2026-03-26 19:55 by 不吃魚的貓
[考研] 266分求材料化工冶金矿业等专业的调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-26 3/150 2026-03-26 19:16 by JourneyLucky
[考研] 一志愿哈工大,085400,320,求调剂 +4 gdlf9999 2026-03-24 4/200 2026-03-25 23:01 by boxking200
[考研] 0854电子信息求调剂 +7 α____ 2026-03-22 9/450 2026-03-25 13:37 by α____
[考研] 上海电力大学材料防护与新材料重点实验室招收调剂研究生(材料、化学、电化学,环境) +4 我爱学电池 2026-03-23 4/200 2026-03-25 00:59 by 1027_324
[考研] 080500求调剂 +3 zzzzfan 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:38 by barlinike
[考研] 一志愿国科过程所081700,274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 一志愿070300浙大化学358分,求调剂! +4 酥酥鱼.. 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:12 by Iveryant
[考研] 306求调剂 +5 来好运来来来 2026-03-22 5/250 2026-03-22 16:17 by BruceLiu320
[考研] 求调剂院校信息 +6 CX 330 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:25 by 无懈可击111
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 一志愿深大,0703化学,总分302,求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
信息提示
请填处理意见