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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 含有咪唑的蛋白溶液用什么方法定量
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rinp

木虫 (正式写手)

[求助] 含有咪唑的蛋白溶液用什么方法定量

请问各位用含有咪唑的纯化蛋白溶液能否用Bradford法定量，如果不能应该用什么方法定量呢？
如果能明确详细解答，帮上忙就送上10个BB！！
多谢！！
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海到无边天做岸山登绝顶我为峰.博士学位就是鞋里的一粒米，不拿不舒服，拿了不能吃！
1楼 2012-09-27 20:19:54
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qianshengguo

铜虫 (小有名气)
★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-29 14:45:18
可以直接测。SDS电泳，将电泳图扫描或通过photoshop，数据分析计算得到累计密度，即蛋白溶度。用分光光度计测溶度偏差很大，尤其是咪唑、尿素等许多物质都对吸光值有影响，测得值一般偏大，有时候能偏差一倍（我自己曾经经历过）。
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8楼2012-09-29 09:58:50
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青豆同学

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
rinp: 金币+1, 谢谢回复，但是透析一般耗时很长啊而且蛋白损失严重，测280就是针对个别氨基酸的，非常之不准吧~~ 2012-09-28 10:24:40
透析后再定不可以么？梯度稀释后用分光光度计测280也行，但是要抠出背景值
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谢谢你给我信心与力量，我会努力！
2楼2012-09-27 21:33:06
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
rinp: 金币+1, 谢谢回复！买试剂盒这个比较不现实~ 2012-09-28 10:26:36
有钱的话买个试剂盒。我用过biorad RC DC protein assay，还不错。简单的说是用TCA沉淀后重新溶解后就和普通蛋白样品一样定量了。
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3楼2012-09-28 06:42:24
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青豆同学

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

透析时，一小时换一次Buffer，3小时就可以，你体积应该不会很大，不需要多少时间
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谢谢你给我信心与力量，我会努力！
4楼2012-09-28 12:26:29
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