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rinp

木虫 (正式写手)

[求助] 含有咪唑的蛋白溶液用什么方法定量

请问各位用含有咪唑的纯化蛋白溶液能否用Bradford法定量,如果不能应该用什么方法定量呢?
如果能明确详细解答,帮上忙就送上10个BB!!
多谢!!
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
rinp: 金币+1, 谢谢回复!买试剂盒这个比较不现实~ 2012-09-28 10:26:36
有钱的话买个试剂盒。我用过biorad RC DC protein assay,还不错。简单的说是用TCA沉淀后重新溶解后就和普通蛋白样品一样定量了。
3楼2012-09-28 06:42:24
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青豆同学

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
rinp: 金币+1, 谢谢回复,但是透析一般耗时很长啊而且蛋白损失严重,测280就是针对个别氨基酸的,非常之不准吧~~ 2012-09-28 10:24:40
透析后再定不可以么?梯度稀释后用分光光度计测280也行,但是要抠出背景值
谢谢你给我信心与力量,我会努力!
2楼2012-09-27 21:33:06
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青豆同学

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

透析时,一小时换一次Buffer,3小时就可以,你体积应该不会很大,不需要多少时间
谢谢你给我信心与力量,我会努力!
4楼2012-09-28 12:26:29
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-09-28 06:42:24
有钱的话买个试剂盒。我用过biorad RC DC protein assay,还不错。简单的说是用TCA沉淀后重新溶解后就和普通蛋白样品一样定量了。

你的Bradford不是买的kit吗?你有没有离心超滤管,milipore YM-3的离心超滤管。用10倍无咪唑的的溶液洗三次可以把浓度降到很低,测试的背景小,基本没有干扰了。
5楼2012-09-28 14:10:47
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