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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 诱导蛋白的浓缩
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liulanhua

金虫 (正式写手)

[求助] 诱导蛋白的浓缩

请教各位：
经过诱导，从大肠杆菌内提取含His标签的蛋白，经纯化柱纯化后蛋白溶液中含有咪唑，因此用pH 7.4的PBS缓冲液透析咪唑。之后的含盐的蛋白溶液能直接进行冷冻干燥吗？
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努力会有收获！
1楼 2011-06-27 15:30:19
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chengjg

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

liulanhua(金币+2): 2011-06-28 09:06:16
不行 如果含盐量高的话冻干由于浓缩效应盐离子浓度会很高破坏蛋白质。而且蛋白复溶性很差。
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2楼2011-06-27 22:56:56
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liulanhua

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by chengjg at 2011-06-27 22:56:56:
不行 如果含盐量高的话冻干由于浓缩效应盐离子浓度会很高破坏蛋白质。而且蛋白复溶性很差。

那应该怎么办啊？
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努力会有收获！
3楼2011-06-28 09:06:41
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guozejing

银虫 (小有名气)
进行透析或上除盐柱
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疯狂
4楼2011-07-04 22:59:52
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
透析很慢的，我很喜欢用GE的预装脱盐柱。
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5楼2011-07-05 00:50:19
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liulanhua

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-07-05 00:50:19:
透析很慢的，我很喜欢用GE的预装脱盐柱。

用的逐级稀释的PBS缓冲液透析，出现了很多白色沉淀！不知道是不是蛋白析出了还是咋的
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6楼2011-07-05 14:43:17
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
白色沉淀是不是你想要的蛋白质？
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7楼2011-07-05 16:39:41
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liulanhua

金虫 (正式写手)
不知道呢，今天跑了电泳，验证一下
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8楼2011-07-05 18:48:15
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
没有专一的鉴别方法吗？例如如果是酶，就测定一下活力之类的。跑胶不能定量，不知道有没有损失，损失多少，只能看有没有。即使是借助软件来估算，也不一定准确。
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9楼2011-07-05 19:12:33
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liulanhua

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-07-05 19:12:33:
没有专一的鉴别方法吗？例如如果是酶，就测定一下活力之类的。跑胶不能定量，不知道有没有损失，损失多少，只能看有没有。即使是借助软件来估算，也不一定准确。

我不懂啊，还有什么方法吗?不是酶，是金属硫蛋白
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10楼2011-07-05 20:04:10
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