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liulanhua

金虫 (正式写手)

[求助] 诱导蛋白的浓缩

请教各位:
经过诱导,从大肠杆菌内提取含His标签的蛋白,经纯化柱纯化后蛋白溶液中含有咪唑,因此用pH 7.4的PBS缓冲液透析咪唑。之后的含盐的蛋白溶液能直接进行冷冻干燥吗?
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chengjg

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

liulanhua(金币+2): 2011-06-28 09:06:16
不行 如果含盐量高的话冻干由于浓缩效应盐离子浓度会很高破坏蛋白质。而且蛋白复溶性很差。
2楼2011-06-27 22:56:56
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liulanhua

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by chengjg at 2011-06-27 22:56:56:
不行 如果含盐量高的话冻干由于浓缩效应盐离子浓度会很高破坏蛋白质。而且蛋白复溶性很差。

那应该怎么办啊?
努力会有收获!
3楼2011-06-28 09:06:41
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guozejing

银虫 (小有名气)

进行透析或上除盐柱
疯狂
4楼2011-07-04 22:59:52
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

透析很慢的,我很喜欢用GE的预装脱盐柱。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2011-07-05 00:50:19
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liulanhua

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-07-05 00:50:19:
透析很慢的,我很喜欢用GE的预装脱盐柱。

用的逐级稀释的PBS缓冲液透析,出现了很多白色沉淀!不知道是不是蛋白析出了还是咋的
努力会有收获!
6楼2011-07-05 14:43:17
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

白色沉淀是不是你想要的蛋白质?
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
7楼2011-07-05 16:39:41
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liulanhua

金虫 (正式写手)

不知道呢,今天跑了电泳,验证一下
努力会有收获!
8楼2011-07-05 18:48:15
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

没有专一的鉴别方法吗?例如如果是酶,就测定一下活力之类的。跑胶不能定量,不知道有没有损失,损失多少,只能看有没有。即使是借助软件来估算,也不一定准确。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
9楼2011-07-05 19:12:33
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liulanhua

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-07-05 19:12:33:
没有专一的鉴别方法吗?例如如果是酶,就测定一下活力之类的。跑胶不能定量,不知道有没有损失,损失多少,只能看有没有。即使是借助软件来估算,也不一定准确。

我不懂啊,还有什么方法吗?不是酶,是金属硫蛋白
努力会有收获!
10楼2011-07-05 20:04:10
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