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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 含有咪唑的蛋白溶液用什么方法定量
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rinp

木虫 (正式写手)

[求助] 含有咪唑的蛋白溶液用什么方法定量

请问各位用含有咪唑的纯化蛋白溶液能否用Bradford法定量，如果不能应该用什么方法定量呢？
如果能明确详细解答，帮上忙就送上10个BB！！
多谢！！
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海到无边天做岸山登绝顶我为峰.博士学位就是鞋里的一粒米，不拿不舒服，拿了不能吃！
1楼 2012-09-27 20:19:54
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protein780

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-09-29 14:44:58
可以用，吸光值不同，但是这样要求你的蛋白必须非常纯，因为所有的试剂盒的原理都是buffer跟蛋白反应，这样定量出来的是总蛋白包括降解蛋白，微量的杂蛋白，而且步骤相对麻烦些，我觉得简单有又比较可靠的是将标准的BSA稀释成1mg/ml，2mg/ml...然后跟你的蛋白一块跑SDS-PAGE，我觉得这是定量目标蛋白的相对靠谱的，当然，可以不用BSA，最好用跟你的蛋白大小差不多的已定量的蛋白做Marker，比如有的蛋白280吸收比较准。
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6楼2012-09-28 18:15:37
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青豆同学

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
rinp: 金币+1, 谢谢回复，但是透析一般耗时很长啊而且蛋白损失严重，测280就是针对个别氨基酸的，非常之不准吧~~ 2012-09-28 10:24:40
透析后再定不可以么？梯度稀释后用分光光度计测280也行，但是要抠出背景值
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谢谢你给我信心与力量，我会努力！
2楼2012-09-27 21:33:06
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
rinp: 金币+1, 谢谢回复！买试剂盒这个比较不现实~ 2012-09-28 10:26:36
有钱的话买个试剂盒。我用过biorad RC DC protein assay，还不错。简单的说是用TCA沉淀后重新溶解后就和普通蛋白样品一样定量了。
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3楼2012-09-28 06:42:24
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青豆同学

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

透析时，一小时换一次Buffer，3小时就可以，你体积应该不会很大，不需要多少时间
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谢谢你给我信心与力量，我会努力！
4楼2012-09-28 12:26:29
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