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rinp

木虫 (正式写手)

[求助] 含有咪唑的蛋白溶液用什么方法定量

请问各位用含有咪唑的纯化蛋白溶液能否用Bradford法定量,如果不能应该用什么方法定量呢?
如果能明确详细解答,帮上忙就送上10个BB!!
多谢!!
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protein780

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-09-29 14:44:58
可以用,吸光值不同,但是这样要求你的蛋白必须非常纯,因为所有的试剂盒的原理都是buffer跟蛋白反应,这样定量出来的是总蛋白包括降解蛋白,微量的杂蛋白,而且步骤相对麻烦些,我觉得简单有又比较可靠的是将标准的BSA稀释成1mg/ml,2mg/ml...然后跟你的蛋白一块跑SDS-PAGE,我觉得这是定量目标蛋白的相对靠谱的,当然,可以不用BSA,最好用跟你的蛋白大小差不多的已定量的蛋白做Marker,比如有的蛋白280吸收比较准。
6楼2012-09-28 18:15:37
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青豆同学

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
rinp: 金币+1, 谢谢回复,但是透析一般耗时很长啊而且蛋白损失严重,测280就是针对个别氨基酸的,非常之不准吧~~ 2012-09-28 10:24:40
透析后再定不可以么?梯度稀释后用分光光度计测280也行,但是要抠出背景值
谢谢你给我信心与力量,我会努力!
2楼2012-09-27 21:33:06
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
rinp: 金币+1, 谢谢回复!买试剂盒这个比较不现实~ 2012-09-28 10:26:36
有钱的话买个试剂盒。我用过biorad RC DC protein assay,还不错。简单的说是用TCA沉淀后重新溶解后就和普通蛋白样品一样定量了。
3楼2012-09-28 06:42:24
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青豆同学

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

透析时,一小时换一次Buffer,3小时就可以,你体积应该不会很大,不需要多少时间
谢谢你给我信心与力量,我会努力!
4楼2012-09-28 12:26:29
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