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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 含有咪唑的蛋白溶液用什么方法定量
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rinp

木虫 (正式写手)

[求助] 含有咪唑的蛋白溶液用什么方法定量

请问各位用含有咪唑的纯化蛋白溶液能否用Bradford法定量，如果不能应该用什么方法定量呢？
如果能明确详细解答，帮上忙就送上10个BB！！
多谢！！
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海到无边天做岸山登绝顶我为峰.博士学位就是鞋里的一粒米，不拿不舒服，拿了不能吃！
1楼 2012-09-27 20:19:54
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-09-29 14:45:08
楼主大概是做的His-tag纯化吧。虽然不知道你洗脱液的咪唑浓度。反正一般的蛋白测定方法不能直接测，因为你直接测洗脱液就有很高的吸收。必须把咪唑浓度降下来。要简单的话，我觉得你做个丙酮沉淀或者甲醇沉淀什么的。
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7楼2012-09-29 09:54:21
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青豆同学

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
rinp: 金币+1, 谢谢回复，但是透析一般耗时很长啊而且蛋白损失严重，测280就是针对个别氨基酸的，非常之不准吧~~ 2012-09-28 10:24:40
透析后再定不可以么？梯度稀释后用分光光度计测280也行，但是要抠出背景值
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谢谢你给我信心与力量，我会努力！
2楼2012-09-27 21:33:06
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
rinp: 金币+1, 谢谢回复！买试剂盒这个比较不现实~ 2012-09-28 10:26:36
有钱的话买个试剂盒。我用过biorad RC DC protein assay，还不错。简单的说是用TCA沉淀后重新溶解后就和普通蛋白样品一样定量了。
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3楼2012-09-28 06:42:24
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青豆同学

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

透析时，一小时换一次Buffer，3小时就可以，你体积应该不会很大，不需要多少时间
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谢谢你给我信心与力量，我会努力！
4楼2012-09-28 12:26:29
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