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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » ＰＣＲ仪做连接
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添翼如虎

新虫 (小有名气)

[交流] ＰＣＲ仪做连接已有8人参与

弱弱的问一下，用ＰＣＲ仪做连接，16摄氏度过夜，程序怎么设置呀？PCR仪连续开一晚上可以吗？ 小妹这是第一次做克隆，实验室也没人做过，没经验啊
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1楼2012-09-24 10:45:01
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
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其实连接条件没那么苛刻，室温过夜也没什么关系。如果是粘性末端，我都是连一两个小时就做转化了。
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8楼2012-09-25 12:38:30
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foxcl

铁虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-09-24 14:12:34
我是设１６度，３０min，２４个循环，总１２个小时。
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2楼2012-09-24 11:16:23
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547star

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
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rainwander: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-24 14:12:41
半导体制冷效率很低，而且容易坏。很多PCR仪器就是因为做连接把半导体制冷片烧坏而不能用的。不建议用PCR仪做低温连接反应。没有低温水浴，用的小泡沫箱做16度水浴密封好放4度冰箱还好些。
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为什么
3楼2012-09-24 11:28:31
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小河弯弯07

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
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scelab: 金币+2, 这也行？！载体和片段分别多大？ 2012-09-24 14:21:20
做连接不用那么长吧？我都是16度2小时啊~
载体pMD18T,片段500-700bp

[ Last edited by 小河弯弯07 on 2012-9-24 at 15:50 ]
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4楼2012-09-24 14:04:49
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