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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » ＰＣＲ仪做连接
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添翼如虎

新虫 (小有名气)

[交流] ＰＣＲ仪做连接已有8人参与

弱弱的问一下，用ＰＣＲ仪做连接，16摄氏度过夜，程序怎么设置呀？PCR仪连续开一晚上可以吗？ 小妹这是第一次做克隆，实验室也没人做过，没经验啊
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1楼2012-09-24 10:45:01
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foxcl

铁虫 (正式写手)
★ ★
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rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-09-24 14:12:34
我是设１６度，３０min，２４个循环，总１２个小时。
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2楼2012-09-24 11:16:23
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547star

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
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rainwander: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-24 14:12:41
半导体制冷效率很低，而且容易坏。很多PCR仪器就是因为做连接把半导体制冷片烧坏而不能用的。不建议用PCR仪做低温连接反应。没有低温水浴，用的小泡沫箱做16度水浴密封好放4度冰箱还好些。
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为什么
3楼2012-09-24 11:28:31
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小河弯弯07

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
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scelab: 金币+2, 这也行？！载体和片段分别多大？ 2012-09-24 14:21:20
做连接不用那么长吧？我都是16度2小时啊~
载体pMD18T,片段500-700bp

[ Last edited by 小河弯弯07 on 2012-9-24 at 15:50 ]
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4楼2012-09-24 14:04:49
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
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amisking: 金币+3, 鼓励新虫发帖交流，欢迎道生物医药区 2012-09-24 21:33:26
可以设定为16度99小时，第二天来了终止程序就可以了。PCR仪一直开着没什么问题。要注意的是一般PCR仪为了防止程序过程中溶液蒸发，是从顶部加热的，预设温度一般是超过100度的。如果做链接，最好不要这么高，如果是可以调的话，弄个室温就行了。
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5楼2012-09-24 15:35:35
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trizol11

木虫 (正式写手)
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rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-09-25 16:56:11
直接设置16度，forever保存，可以了。过夜 16小时。时间短连接效果不好
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任重道远……
6楼2012-09-24 20:34:51
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
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amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-09-24 21:33:37
看来都是有钱人啊，PCR仪做链接？！一个水浴锅才多钱啊，不行就买个金属浴的小件，再不行就楼上说的大泡沫盒子，装满水调到16℃，胶带密封，重物压紧，或者干脆4℃时间长一些连接。
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7楼2012-09-24 21:21:32
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
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其实连接条件没那么苛刻，室温过夜也没什么关系。如果是粘性末端，我都是连一两个小时就做转化了。
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8楼2012-09-25 12:38:30
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ilyzp

铜虫 (初入文坛)
★
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PCR过夜运行对机子损伤很大，还是不要这样了，可以放在4度冰箱过夜，或者拿一个保温杯装上冰块和水调一下温度，这个很容易解决的
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9楼2012-09-27 11:05:03
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bragren123

木虫 (小有名气)
★
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PCR仪可以做连接，但我一般不建议学生来做，对仪器损伤较大。如要做，要把热盖关掉，不然不利于连接。
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10楼2012-12-28 13:27:35
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