24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xuyan_1215

新虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 2610.5
红花: 1
帖子: 115
在线: 37.2小时
虫号: 1616224
注册: 2012-02-14
专业: 生物大分子结构与功能

[求助] 阳性克隆的筛选问题

请教各位虫友，最近我在做连接，在转化之后挑取平板上的单菌落进行菌落pcr，结果显示为阳性的克隆却在双酶切的时候没有目的片段，而且测序也没有信号。请问这是怎么回事呢？用什么方法检验阳性克隆比较科学呢？（注：菌落pcr时阴阳性对照都设置了，阴性没P出来，阳性P出来的条带比菌落亮）

[ Last edited by xuyan_1215 on 2012-9-19 at 17:15 ]

回复此楼

» 猜你喜欢

HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？已经有0人回复
His标签蛋白纯化怎么才能快？已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有289人回复
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析已经有0人回复
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用已经有0人回复
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点已经有0人回复
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用已经有0人回复
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点已经有0人回复
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？已经有0人回复
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析已经有0人回复
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性已经有0人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

1楼 2012-09-19 17:11:12

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

reallpf

木虫 (正式写手)

MolEPI: 6
应助: 150 (高中生)
金币: 3388.3
散金: 2
红花: 12
帖子: 342
在线: 72.6小时
虫号: 1892494
注册: 2012-07-14
性别: GG
专业: 微生物生理与生物化学

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xuyan_1215: 金币+3 2012-09-20 14:41:36

引用回帖:

5楼: Originally posted by xuyan_1215 at 2012-09-20 09:51:55
这样的思路也想过，但是我一般挑16个菌落进行pcr，每次都能出现10个以上的阳性克隆，那要是逐个挑取提质粒，工作量相当大呀，你一般是怎么做的？...

工作量相当大？
一般转化后要结合几个方面确认后再送出测序：
菌落PCR：可以使用目的片段引物，载体引物，以及2者搭配鉴定。
选阳性克隆培养提质粒，PCR再鉴定。
酶切鉴定。
以上都正确才会送出测序。这些过程都可以在1天内完成，算不上工作量大吧。直接送出测序不仅浪费时间，如果错了回来还得重来，得不偿失。