24小时热门版块排行榜    

查看: 2411  |  回复: 15
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xuyan_1215

新虫 (小有名气)

[求助] 阳性克隆的筛选问题

请教各位虫友,最近我在做连接,在转化之后挑取平板上的单菌落进行菌落pcr,结果显示为阳性的克隆却在双酶切的时候没有目的片段,而且测序也没有信号。请问这是怎么回事呢?用什么方法检验阳性克隆比较科学呢?(注:菌落pcr时阴阳性对照都设置了,阴性没P出来,阳性P出来的条带比菌落亮)

[ Last edited by xuyan_1215 on 2012-9-19 at 17:15 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xuyan_1215: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-09-20 14:41:19
菌落PCR只能初步的判断下是否连接转化成功,但是假阳性率是非常高的,原因是因为裂解液残留的问题,你可以把你挑的几个阳性克隆进行扩大培养,然后提取质粒做质粒PCR和质粒酶切,这样就能确保没问题。
生物化学与分子生物学
4楼2012-09-20 08:03:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

无疆@行者

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
菌液PCR快速,简单,通量大,但是有假阳性率,一般就是菌液PCR后,酶切鉴定,然后测序,如果经费充足,或者节省时间的话,就是菌液PCR,然后直接测序。一般测序结果是判断标准
2楼2012-09-19 18:17:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuyan_1215

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 无疆@行者 at 2012-09-19 18:17:10
菌液PCR快速,简单,通量大,但是有假阳性率,一般就是菌液PCR后,酶切鉴定,然后测序,如果经费充足,或者节省时间的话,就是菌液PCR,然后直接测序。一般测序结果是判断标准

我也是这样做的,每次做完菌液pcr就送样测序,但是结果总是无信号,这假阳性的概率也太大了。。。
3楼2012-09-20 07:09:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuyan_1215

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lidonghong at 2012-09-20 08:03:45
菌落PCR只能初步的判断下是否连接转化成功,但是假阳性率是非常高的,原因是因为裂解液残留的问题,你可以把你挑的几个阳性克隆进行扩大培养,然后提取质粒做质粒PCR和质粒酶切,这样就能确保没问题。

这样的思路也想过,但是我一般挑16个菌落进行pcr,每次都能出现10个以上的阳性克隆,那要是逐个挑取提质粒,工作量相当大呀,你一般是怎么做的?
5楼2012-09-20 09:51:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料专硕英一数二306 +3 z1z2z3879 2026-03-18 3/150 2026-03-18 17:18 by yeahyou
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +7 步川酷紫123 2026-03-13 7/350 2026-03-18 17:12 by 尽舜尧1
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +5 梨花珞晚风 2026-03-17 5/250 2026-03-18 14:49 by haxia
[考研] 281求调剂(0805) +5 烟汐忆海 2026-03-16 13/650 2026-03-18 14:30 by stone_128
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业(081702)315分求调剂 +9 yangfz 2026-03-17 9/450 2026-03-18 12:38 by 尽舜尧1
[考研] 299求调剂 +5 △小透明* 2026-03-17 5/250 2026-03-18 11:49 by 尽舜尧1
[考研] 307求调剂 +3 冷笙123 2026-03-17 3/150 2026-03-18 09:55 by macy2011
[考研] 0703化学336分求调剂 +6 zbzihdhd 2026-03-15 7/350 2026-03-18 09:53 by zhukairuo
[考研] 265求调剂 +3 梁梁校校 2026-03-17 3/150 2026-03-18 09:12 by zhukairuo
[考研] 293求调剂 +11 zjl的号 2026-03-16 16/800 2026-03-18 08:10 by zhukairuo
[考研] 327求调剂 +6 拾光任染 2026-03-15 11/550 2026-03-15 22:47 by 拾光任染
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
[考研] 求材料调剂 085600英一数二总分302 前三科235 精通机器学习 一志愿哈工大 +4 林yaxin 2026-03-12 4/200 2026-03-13 22:04 by 星空星月
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +9 2026调剂侠 2026-03-12 9/450 2026-03-13 20:46 by 18595523086
[考研] 0703化学求调剂 +7 绿豆芹菜汤 2026-03-12 7/350 2026-03-13 17:25 by njzyff
[考研] 310求调剂 +3 【上上签】 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:16 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +7 18880831720 2026-03-11 7/350 2026-03-13 16:10 by JourneyLucky
[考博] 福州大学杨黄浩课题组招收2026年专业学位博士研究生,2026.03.20截止 +3 Xiangyu_ou 2026-03-12 3/150 2026-03-13 09:36 by duanwu655
[考博] 26读博 +4 Rui135246 2026-03-12 10/500 2026-03-13 07:15 by gaobiao
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
信息提示
请填处理意见