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sjjsy7

银虫 (小有名气)

[求助] 原核表达载体构建老不成功,求助!

本人构水稻基因的原核表达载体(PET-28a),胶回收后老是连不成功,以前也没再意就成功了,但这次老不行;现在想请教一下各位虫友你们在构载体时体系是怎么样的,我的是目的片段:载体=6:1.5  1ul T4酶 1ul buffer 0.5u水。TAKARA的ligation kit 也用过,也不行。希望大家给点意见!!!
           下面是我回收后的电泳图,是8ul上样!

图片1.jpg
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尚慕寒

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

8ul上样都只有这个亮度,浓度确实太低了。载体浓度太低不容易长出斑来,尝试连接体系中加大载体的量吧。建议你重新切载体,我一般连接前跑胶,上样都是1ul。
高山仰止,景行行止,虽不能至,心向往之。
10楼2012-09-18 08:57:38
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ysn5048

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
sjjsy7: 金币+1 2012-09-17 22:17:26
我20微升的体系加 buffer2微升,楼主可以看看连接酶的说明书

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
有时候,一句话,可以改变未来
2楼2012-09-17 12:54:40
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张宏宇123

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
sjjsy7: 金币+2, 有帮助 2012-09-17 22:17:01
检没检测过片段里是否有突变位点?
未来不是梦
3楼2012-09-17 15:16:07
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尚慕寒

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你这图上哪个是载体哪个是片段?怎么有3个大小不同的条带?而且都太淡了!
高山仰止,景行行止,虽不能至,心向往之。
4楼2012-09-17 20:55:55
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