| 查看: 935 | 回复: 9 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
跪求各位高人：这个Western 到底出什么问题了啊
|
||
|
各位虫高人： 小虫我最近在做WESTERN ,做的是tPA,做了有一个月了，但是结果是各种奇怪，我也是通过各种方法去验证，去改正，但是又出了这样的结果，我直接崩溃。首先我的大概流程是这样的。 1，TPA的分子量为63KD，我选用10%的分离胶，5%的浓缩胶，浓缩胶恒压70V, 分离胶是100V. 2，湿转，恒压，110V,1H 40mins。转膜后的胶和NC膜我分别用考马斯亮蓝和丽春红去染色，确认转膜效率很高。 3，用5%的脱脂牛奶封闭1H. 4，一抗稀释比例从1:1000到1:50，前面一直不出来，没有任何条带，直到1:100和1:50，但结果很奇怪，所有蛋白全会曝出来，（结果会在后面附图，稀释液用了封闭液，也用了TBST尝试）。一抗是4度过夜孵育。 5，二抗稀释比例是1:3000，孵育一小时，同样是用过封闭液或TBST 稀释。 6，用ECL发光液，稀释10倍。 7，曝光从最初的3s到后面的2h。 现在不知道是哪里出问题了，可是前面是一直做不出来，曝光的片子上没有任何条带，但是昨天做的一抗稀释比例 1:100和1:50的结果更是诧异，现在我是没法了，请求高人指点一二，小虫我先谢过了。 附注图片：这是一抗1:100的结果 我的目的蛋白条带应该在上面，最亮的条带不是我的目的蛋白，这是怎么回事啊？怎么可以检测到其它蛋白呢，还比目的蛋白的条带亮？  1.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有73人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- Western Blot出现问题
已经有19人回复
- 关于western blot的小问题
已经有12人回复
- western抗体问题
已经有7人回复
- western样品处理问题
已经有5人回复
- 向各位已工作的高人询问下职业规划的问题呀。。。。
已经有4人回复
- western blot时marker问题求助
已经有18人回复
- western和PCR选择问题
已经有7人回复
- 求助Western-bot转膜问题
已经有25人回复
- Western blot中出现的问题-求高手指点
已经有17人回复
- 【分享】新手上路 Western blot问题集合
已经有6人回复
- 【求助】关于神经元的western所遇到的问题
已经有20人回复
- 【求助/交流】请教高人关于WESTERN-BLOT的一些问题
已经有9人回复
- western Blotting 的问题
已经有5人回复
9楼2012-09-10 13:36:08
新人小玥
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 2
- 应助: 17 (小学生)
- 金币: 3203.8
- 散金: 87
- 红花: 8
- 帖子: 451
- 在线: 144.4小时
- 虫号: 704924
- 注册: 2009-02-20
- 专业: 林木遗传育种学
2楼2012-09-08 13:15:59
494750284
木虫 (小有名气)
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 3406.1
- 散金: 76
- 红花: 13
- 帖子: 256
- 在线: 153.6小时
- 虫号: 1033236
- 注册: 2010-06-01
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
3楼2012-09-09 21:35:38
小小技术官
木虫 (正式写手)
- 应助: 39 (小学生)
- 金币: 4529.4
- 散金: 248
- 红花: 6
- 帖子: 768
- 在线: 232.5小时
- 虫号: 1972611
- 注册: 2012-09-04
- 性别: GG
- 专业: 常微分方程与动力系统
4楼2012-09-10 00:44:43
10