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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pcr产物测序
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)

[交流] pcr产物测序 已有6人参与

各位牛人，有谁在生工做过测序呢？他那个具体事由什么要求能否说的详细一点呢？我第一次送去说浓度不够，第二次说是上下游有重叠，不知道是什么原因，有什么解决办法？多谢啦
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1楼 2012-09-05 11:41:01
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chenguestc

木虫 (职业作家)
★
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PCR产物直接测序容易出现或这样或那样的问题，建议楼主回收，连接转化后送菌液或者自己提质粒送测。
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2楼2012-09-05 12:52:43
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lidonghong

金虫 (正式写手)
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你是需要PCR产物测序还是质粒测序，如果是产物测序的话，建议你优化下pcr条件后P50ul体系后让公司纯化后（一个反应纯化好像是10块钱）再送往测序，如果是质粒测序就直接送菌过去吧！
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生物化学与分子生物学
3楼2012-09-05 16:06:43
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sd3824289

木虫 (正式写手)
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建议测序还是送菌液比较好，这样的话比较稳定！如果送PCR产物，在运送的过程中可能或多或少对样品会有影响！
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坚持，就像流星，即使知道最后的结果，也要勇敢的走到最后！
4楼2012-09-05 16:28:13
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chenguestc at 2012-09-05 12:52:43
PCR产物直接测序容易出现或这样或那样的问题，建议楼主回收，连接转化后送菌液或者自己提质粒送测。

那送质粒的话，测序范围应该怎样写啊？不能全测通吧？
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5楼2012-09-05 16:47:28
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wangcongxs

银虫 (著名写手)
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直接用PCR产物测序，测序不准确，建议纯化后再送样或是克隆后送菌液测序或质粒
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做最好的自己
6楼2012-09-05 17:22:04
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chenguestc

木虫 (职业作家)
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引用回帖:
5楼: Originally posted by piaoyunokok at 2012-09-05 16:47:28
那送质粒的话，测序范围应该怎样写啊？不能全测通吧？...

用通用引物即可，告诉对方你的片段的大约范围。
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7楼2012-09-05 17:39:21
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zdfang83

木虫 (正式写手)
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我们都是连T载体之后送菌液的，据他们业务员说送质粒他们好像也是要再做转化的
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8楼2012-09-05 18:09:32
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yanjing27

金虫 (初入文坛)
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直接送PCR产物测序有的时候跟连T转化后测序差的还挺多的，还是连载体之后送菌液测序吧
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9楼2012-09-05 20:43:07
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wangcongxs at 2012-09-05 17:22:04
直接用PCR产物测序，测序不准确，建议纯化后再送样或是克隆后送菌液测序或质粒

嗯，是纯化后的呢
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10楼2012-09-05 23:56:04
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