| 查看: 3304 | 回复: 10 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
youngsun50木虫 (正式写手)
|
[求助]
双向电泳换IPG胶条横条纹严重
|
|
|
各位虫友，我的样品是G-细菌，之前用PH3-10的胶条跑过，结果还可以，蛋白密集在4-7之间，但换了PH4-7的胶条后，做了两次均横条纹严重，尤其是正极端。这三次的样品处理大致相同：超声破碎10min后，DNA琼脂糖电泳检测大多碎片都集中在150bp之下，超滤管除盐大约盐分稀释了80倍（过程中样品都是在裂解液的，pH3-10的那次稀释100倍）。水化上样，3-10上样500ug，4-7上样800ug，上样前均离心除不溶物。 IEF程序为： 1 step 30v 12h; 2 step 200v 1h; 3 step 500v 1h; 4 grad 1000v 1h; 5 grad 8000v 2h; 6 step 8000v hold（手动停止，-76保存） 其中3-10的那次8000v运行了85kVh，电流检测有明显降低； 4-7的第一次8000v运行了102kVh，电流检测变化甚微，从30/31uA微降至27/8uA； 4-7第二次8000v运行了86kVh，电流检测变化甚微，从23/24uA微降至18/19uA PAGE胶为12.5% 电泳程序相同 请问：怎么4-7的聚焦这么差啊，尤其正极端，虽说3-10的正极端也有条纹但也不至于范围这么大啊？苦恼中 PS：三次电泳图如附件  3-10 + - 24cm.jpg  4-7第二次+ - 24cm.jpg  4-7第一次+ - 24cm.jpg [ Last edited by youngsun50 on 2012-9-1 at 00:13 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有239人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- （求助）蛋白质双向电泳胶显色后怎么会跑成这个样子。。。
已经有10人回复
- 双向电泳条纹等问题求助
已经有15人回复
- 跑植物叶片蛋白的双向电泳 需要点Mark吗 多大分子量的啊 还有 多大的胶条可以啊
已经有22人回复
- 双向电泳跑完的分离胶染色后变大
已经有4人回复
- 双向电泳，等电聚焦后，胶条酸端，总是能看到白色蛋白，这该怎么解决啊 ？？？？
已经有6人回复
- DNA琼脂糖凝胶电泳所需DNA的最低浓度
已经有6人回复
- 我的PCR电泳图怎么这样的啊。。。
已经有11人回复
- 双向电泳的胶条，跑后挤出来，就分不清碱性端和酸性端了，请大侠们给点建议
已经有4人回复
- 琼脂糖凝胶电泳，跑的条带有点难看
已经有15人回复
- 关于凝胶形成过程中产生拖尾的现象
已经有9人回复
- 胶回收产物连接转化后菌液PCR电泳条带出现问题
已经有8人回复
- 【求助/交流】急！！！琼脂糖凝胶电泳的问题，跑不出条带了！！
已经有8人回复
- 【求助/交流】跑电泳的胶，我是重复利用的！但是跑的条带非常模糊！
已经有21人回复
- 【求助/交流】凝胶电泳时如何分开大小相差10-20个碱基对的目的条带
已经有4人回复
lanziliuli
银虫 (小有名气)
- 应助: 17 (小学生)
- 金币: 292.7
- 红花: 1
- 帖子: 81
- 在线: 49.5小时
- 虫号: 1931122
- 注册: 2012-08-09
- 性别: MM
- 专业: 心理学
6楼2012-09-04 15:47:20
lanziliuli
银虫 (小有名气)
- 应助: 17 (小学生)
- 金币: 292.7
- 红花: 1
- 帖子: 81
- 在线: 49.5小时
- 虫号: 1931122
- 注册: 2012-08-09
- 性别: MM
- 专业: 心理学
2楼2012-09-03 13:55:59
youngsun50
木虫 (正式写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 2640.6
- 散金: 340
- 红花: 1
- 帖子: 472
- 在线: 275.1小时
- 虫号: 852073
- 注册: 2009-09-20
- 专业: 系统生物学
3楼2012-09-03 14:35:21
4楼2012-09-03 14:38:54
