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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 如何PCR出链霉菌的一个7KB的片段
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0008meng

至尊木虫 (正式写手)

[求助] 如何PCR出链霉菌的一个7KB的片段

各位大虾，小弟最近准备把链霉菌的一个7Kb大的片段给P出来。但听说链霉菌比较难做，心里怕第一步就失败。所以请问大家在链霉菌这方面有什么经验啊？有没有人曾经这样做成功过啊？求交流~
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1楼 2012-08-30 12:38:30
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sadc

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
0008meng: 金币+1 2012-08-31 10:19:18
用Takara的LATaq，没有问题的，10kb都没有问题。
提基因组的时候枪头最好剪平一点，不要过度剪切DNA。
另外提的各环节，要除去上清的时候，注意去除干净，保证尽可能少的蛋白污染。
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4楼2012-08-31 07:05:52
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tanche163

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
0008meng: 金币+1 2012-08-31 10:11:54
0008meng: 金币+1 2012-08-31 10:15:50
哥用kod+dmso成功p出5kb，长点应该也可以，先试试呗，实在不行就在中间找个单酶切位点分开p，搬到质粒上拼

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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阳光总在风雨后
2楼2012-08-31 00:14:37
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liufuliang

新虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
0008meng: 金币+2 2012-08-31 10:16:04
宝生物公司takara有一种专门扩增长片段dna的酶，10kb都没问题。但是很贵。10年轻就是1000多块10ul。
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慢慢来！
3楼2012-08-31 00:23:37
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andreai

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
0008meng: 金币+1 2012-08-31 10:19:23
我不知道步移法可不可以，不过要设计3个或3个以上引物吧
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5楼2012-08-31 07:46:21
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