24小时热门版块排行榜    

查看: 3728  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

皇马铁卫

铜虫 (正式写手)


[交流] 酵母转化假阳性

最近在做毕赤酵母电转。转的是PCR片段,1.7kb,带G418抗性基因。做了很多次,药物板上长了很多,转涂在新的药物板上仍然可以长,但是提基因组做PCR就是没有。阴性对照的板子上没长。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wujunchina2002

木虫 (初入文坛)


★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-08-31 15:58:34
皇马铁卫: 金币+3 2012-08-31 18:04:36
皇马铁卫: 回帖置顶 2012-08-31 18:04:37
我以前做酵母转化也遇到过和你一模一样的情况。用G418做就是这个样子。那时差不多200个克隆中才有一个是阳性的,其他全是假阳性。后来换用zeocin抗生素就好了,没有假阳性问题。我也试图寻找过用G418时消除假阳性的办法,比如提高抗生素浓度等,但是根本没有用。
12楼2012-08-31 11:24:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

piaoyunokok

木虫 (正式写手)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
皇马铁卫: 金币+1 2012-08-30 16:47:08
会不会是你的G418失效了呀?你添加的浓度是多大呢?
2楼2012-08-30 11:11:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

皇马铁卫

铜虫 (正式写手)


引用回帖:
2楼: Originally posted by piaoyunokok at 2012-08-30 11:11:49
会不会是你的G418失效了呀?你添加的浓度是多大呢?

我已经加到300μg/ml。阴性的是没有长啊
3楼2012-08-30 11:37:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gwd0312

木虫 (正式写手)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
皇马铁卫: 金币+2, 这个有可能 2012-08-31 09:12:44
可能是你提取方法有问题,或者你提取的基因组DNA 浓度过大导致P不出来,最后一种可能就是你的PCR程序有问题!
4楼2012-08-30 11:47:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +9 Tide man 2026-08-10 10/500 2026-08-13 20:33 by 温淼淼淼
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] filecode +14 documentary 2026-08-10 16/800 2026-08-13 16:39 by 润生71
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
信息提示
请填处理意见