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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酵母转化假阳性
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皇马铁卫

铜虫 (正式写手)

[交流] 酵母转化假阳性

最近在做毕赤酵母电转。转的是PCR片段，1.7kb，带G418抗性基因。做了很多次，药物板上长了很多，转涂在新的药物板上仍然可以长，但是提基因组做PCR就是没有。阴性对照的板子上没长。
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1楼 2012-08-30 10:58:39
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wujunchina2002

木虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-08-31 15:58:34
皇马铁卫: 金币+3 2012-08-31 18:04:36
皇马铁卫: 回帖置顶 2012-08-31 18:04:37
我以前做酵母转化也遇到过和你一模一样的情况。用G418做就是这个样子。那时差不多200个克隆中才有一个是阳性的，其他全是假阳性。后来换用zeocin抗生素就好了，没有假阳性问题。我也试图寻找过用G418时消除假阳性的办法，比如提高抗生素浓度等，但是根本没有用。
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12楼2012-08-31 11:24:15
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
皇马铁卫: 金币+1 2012-08-30 16:47:08
会不会是你的G418失效了呀?你添加的浓度是多大呢？
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2楼2012-08-30 11:11:49
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皇马铁卫

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by piaoyunokok at 2012-08-30 11:11:49
会不会是你的G418失效了呀?你添加的浓度是多大呢？

我已经加到300μg/ml。阴性的是没有长啊
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3楼2012-08-30 11:37:37
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gwd0312

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
皇马铁卫: 金币+2, 这个有可能 2012-08-31 09:12:44
可能是你提取方法有问题，或者你提取的基因组DNA 浓度过大导致P不出来，最后一种可能就是你的PCR程序有问题！
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4楼2012-08-30 11:47:30
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