应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于提高转化整合率
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
131/2返回列表12下一页
查看: 1140  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

雨后郁金香

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于提高转化整合率 已有4人参与

本人做一个微生物的转化，目前只能确定的是质粒转进去了，但是它没有整合到基因组上，想问问，有没有人做过这方面的，怎样可以提高或者说是让质粒整合到基因组DNA上……
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-09-01 18:57:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

liouwzh

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我怀疑楼主可能没有将质粒导入菌体。因为通过抗生素标记的筛选由于菌株的突变获得抗性而造成假阳性。而且一般来说整合型穿梭质粒大部分都是自杀质粒，导入目的宿主菌时不能在染色体外复制，而只能整合到染色体。建议楼主做个菌落PCR，这样就可验证整个细胞中是否存在质粒。
赞一下(2人) 回复此楼
9楼2010-09-02 10:37:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2):鼓励交流！ 2010-09-01 20:03:03
"质粒转进去了，但是它没有整合到基因组上"
你这个质粒是整合型的吧，难道可以自己复制？
赞一下(2人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
2楼2010-09-01 19:02:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雨后郁金香

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-09-01 19:02:18:
"质粒转进去了，但是它没有整合到基因组上"
你这个质粒是整合型的吧，难道可以自己复制？

老外的一个质粒，还真是不清楚呀。就是验证的时候发现它根本没有整合进基因组上……
赞一下 回复此楼
3楼2010-09-01 20:04:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雨后郁金香

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-09-01 19:02:18:
"质粒转进去了，但是它没有整合到基因组上"
你这个质粒是整合型的吧，难道可以自己复制？

整合型跟复制型怎么区分呀？
赞一下 回复此楼
4楼2010-09-01 20:08:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 雨后郁金香 at 2010-09-01 20:04:46:

老外的一个质粒，还真是不清楚呀。就是验证的时候发现它根本没有整合进基因组上……

一般整合型质粒是不能独立复制的，不知道你转质粒后，是用的什么筛选筛阳性克隆。
赞一下(1人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
5楼2010-09-01 20:08:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雨后郁金香

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-09-01 20:08:49:

一般整合型质粒是不能独立复制的，不知道你转质粒后，是用的什么筛选筛阳性克隆。

先是抗性初筛，然后提基因组DNA做PCR验证。
现在就是发现，菌在抗性培养液中可以增长，但是提基因组验证不到，怀疑是游离在菌体内的……
赞一下 回复此楼
6楼2010-09-01 21:55:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雨后郁金香

金虫 (小有名气)
补充楼上的，刚查了下，这个质粒是个大肠跟酵母的穿梭质粒，这样的话应当只是个复制型的质粒，而不是整合型质粒吧
赞一下 回复此楼
7楼2010-09-01 22:05:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 雨后郁金香 at 2010-09-01 22:05:30:
补充楼上的，刚查了下，这个质粒是个大肠跟酵母的穿梭质粒，这样的话应当只是个复制型的质粒，而不是整合型质粒吧

是不是复制型看看质粒有没有在酵母中的复制位点就可以了。一般是2μ或者CEN。如果是整合型的，就会有整合位点，转化前最好线性化。
赞一下(1人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
8楼2010-09-02 09:10:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雨后郁金香

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by liouwzh at 2010-09-02 10:37:16:
我怀疑楼主可能没有将质粒导入菌体。因为通过抗生素标记的筛选由于菌株的突变获得抗性而造成假阳性。而且一般来说整合型穿梭质粒大部分都是自杀质粒，导入目的宿主菌时不能在染色体外复制，而只能整合到染色体。建 ...

哦，这样啊，我以前还会做菌落PCR，后来觉得菌落PCR存在假阳性，所以都直接提DNA做PCR.可是昨天提的DNA跑出来是三条带，感觉像是质粒，然后PCR也有抗性基因存在，所以就怀疑基因没有整合到染色体上……
赞一下 回复此楼
10楼2010-09-02 12:08:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 雨后郁金香 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 复试调剂 +4 asdasdassda 2026-04-05 4/200 2026-04-06 07:01 by houyaoxu
[考研] 085600材料与化工301分求调剂院校 +6 刺痛jk 2026-04-06 7/350 2026-04-06 06:51 by T可可西里T
[考研] 0703求调剂383分 +9 W55j 2026-04-03 9/450 2026-04-06 06:50 by houyaoxu
[考研] 材料调剂 +14 壹贰贰亿 2026-04-04 14/700 2026-04-05 23:31 by 来看流星雨10
[考研] 302分求调剂 一志愿安徽大学085601 +8 zyx上岸！ 2026-04-04 8/400 2026-04-05 23:08 by lbsjt
[考研] 318求调剂 +11 ykyhsa 2026-04-05 13/650 2026-04-05 12:44 by aidndnjck
[考研] 270求调剂 +9 小杰pp 2026-03-31 11/550 2026-04-05 11:02 by 风雨无晴
[考研] 材料与化工306分找调剂 +12 沧海轻舟e 2026-04-03 13/650 2026-04-04 23:45 by lqwchd
[考研] 一志愿武理材料工程302调剂环化或化工 +19 Doleres 2026-03-31 20/1000 2026-04-04 16:44 by 啊俊！
[考研] 400分求调剂 +3 尴尬且挠头 2026-04-04 3/150 2026-04-04 08:41 by jp9609
[考研] 322求调剂 +6 FZAC123 2026-04-03 6/300 2026-04-03 22:23 by 科研小专家
[考研] 学硕机械工程303求调剂 +6 无名所以叫吴明 2026-03-30 7/350 2026-04-03 16:48 by asdfzly
[考研] 材料专硕322分 +13 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-01 13/650 2026-04-03 16:08 by 哦哦123
[考研] 11408，284分，二战真诚求调剂 +4 12.27 2026-04-02 4/200 2026-04-03 14:14 by dxiaoxin
[考研] 求调剂 +3 心想事成可 2026-04-03 3/150 2026-04-03 11:22 by wangjy2002
[考研] 285求调剂 +7 AZMK 2026-04-02 9/450 2026-04-03 11:12 by wanwan00
[考研] 279求调剂 +5 傅文秋 2026-04-02 5/250 2026-04-02 18:10 by 笔落锦州
[考研] 材料专业求调剂 +10 月月鸟木 2026-04-01 10/500 2026-04-02 12:57 by wxiongid
[考研] 一志愿食品科学与工程083200求调剂 +4 XQTJZ 2026-03-30 4/200 2026-03-31 04:10 by fmesaito
[考研] 抱歉 +3 田洪有 2026-03-30 3/150 2026-03-30 19:11 by 迷糊CCPs
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭