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dhmdddd

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】如何提高DNA片段转化率 已有5人参与

感受态细胞没有问题,转化质粒很容易就能转化成功,DNA片段在转化时加到10微升还是没有转化成功,各位大侠,有什么方法可以提高转化率的吗?先谢过了!!
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boystrong

银虫 (正式写手)


dhmdddd(金币+1): 2010-05-20 12:11:58
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-05-20 12:37:44
呵呵,提高人品。
转化的目的也是让菌的先冷冻后受热,通过膜表面进入。我一般,感受态细胞先放置在冰上,然后加入转化质粒,混匀插入冰上5分钟,再放入热水(30℃)2分钟,再冷冻5分钟,即可放置摇床上。
梦想追风
2楼2010-05-20 12:10:34
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dhmdddd

木虫 (正式写手)

我转化的是DNA片段,质粒转化也是很成功的啊,还有,我们用的都是42℃热激,这个,不太一样的……
上班族,学习ing……
3楼2010-05-20 12:14:02
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boystrong

银虫 (正式写手)

42℃有人这么用,我不喜欢。太烫了,会杀死菌的。你的至多30秒就得拿出来了。
梦想追风
4楼2010-05-20 12:20:20
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)

dhmdddd(金币+1): 2010-05-20 13:24:03
42度很常用啊,90sec没啥问题
5楼2010-05-20 13:12:36
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dhmdddd

木虫 (正式写手)

是啊,大肠杆菌,42℃,90s,,转化子长的还很好的啊,但是杯具的是转化DNA片段就是什么都不长,所以才请教有没有什么方法可以提高转化率的……
上班族,学习ing……
6楼2010-05-20 13:23:56
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boystrong

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
要不你加点甘油和氯化钙。具体的你查查
梦想追风
7楼2010-05-20 13:42:00
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dhmdddd

木虫 (正式写手)

制备感受态细胞的时候不是已经加进去氯化钙和甘油了吗?谢谢,我再查查看了!!
上班族,学习ing……
8楼2010-05-20 13:43:35
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zlmking

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
片段用化转效率太低了,建议用电转。
9楼2010-05-20 21:26:37
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
既然是转质粒挺好,说明感受态细胞可以,那就应该考虑是连接效率的问题。
10楼2010-05-21 08:15:54
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