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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】如何提高DNA片段转化率
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dhmdddd

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】如何提高DNA片段转化率 已有5人参与

感受态细胞没有问题，转化质粒很容易就能转化成功，DNA片段在转化时加到10微升还是没有转化成功，各位大侠，有什么方法可以提高转化率的吗？先谢过了！！
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上班族，学习ing……
1楼 2010-05-20 09:14:40
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boystrong

银虫 (正式写手)
★
dhmdddd(金币+1): 2010-05-20 12:11:58
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-05-20 12:37:44
呵呵，提高人品。
转化的目的也是让菌的先冷冻后受热，通过膜表面进入。我一般，感受态细胞先放置在冰上，然后加入转化质粒，混匀插入冰上5分钟，再放入热水（30℃）2分钟，再冷冻5分钟，即可放置摇床上。
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梦想追风
2楼2010-05-20 12:10:34
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dhmdddd

木虫 (正式写手)
我转化的是DNA片段，质粒转化也是很成功的啊，还有，我们用的都是42℃热激，这个，不太一样的……
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上班族，学习ing……
3楼2010-05-20 12:14:02
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boystrong

银虫 (正式写手)
42℃有人这么用，我不喜欢。太烫了，会杀死菌的。你的至多30秒就得拿出来了。
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梦想追风
4楼2010-05-20 12:20:20
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)
dhmdddd(金币+1): 2010-05-20 13:24:03
42度很常用啊，90sec没啥问题
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5楼2010-05-20 13:12:36
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dhmdddd

木虫 (正式写手)
是啊，大肠杆菌，42℃，90s，，转化子长的还很好的啊，但是杯具的是转化DNA片段就是什么都不长，所以才请教有没有什么方法可以提高转化率的……
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上班族，学习ing……
6楼2010-05-20 13:23:56
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boystrong

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
要不你加点甘油和氯化钙。具体的你查查
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梦想追风
7楼2010-05-20 13:42:00
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dhmdddd

木虫 (正式写手)
制备感受态细胞的时候不是已经加进去氯化钙和甘油了吗？谢谢，我再查查看了！！
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上班族，学习ing……
8楼2010-05-20 13:43:35
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zlmking

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
片段用化转效率太低了，建议用电转。
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9楼2010-05-20 21:26:37
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
既然是转质粒挺好，说明感受态细胞可以，那就应该考虑是连接效率的问题。
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10楼2010-05-21 08:15:54
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