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Viegour

新虫 (初入文坛)

[交流] PRC出现大量非特异性条带 已有8人参与

做700多的PCR,出现的非特异性条带比特异性的还亮,咋整呢……
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主给的条件太少,起码把你的电泳图贴一下,PCR条件,引物等等.另外非特异性条带出现的原因有很多,下面给你列举一下,你可以逐一排除.
原因:
1.引物特异性差
2.模板或引物浓度过高
3.酶量过多
4.Mg2+浓度偏高
5.退火温度偏低
6.循环次数过多
对策:
1.重新设计引物或者使用巢式PCR
2.适当降低模板或引物浓度
3.适当减少酶量
4.降低镁离子浓度
5.适当提高退火温度或使用二阶段温度法
6.减少循环次数
PS:祝楼主实验顺利.
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
10楼2012-08-31 11:31:34
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yaolinlshang

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我的实验也是这样。
最是人间留不住,朱颜辞镜花辞树!
2楼2012-08-28 15:21:57
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三十不惑

铜虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
amisking: 回帖置顶 2012-08-28 19:39:54
amisking: 金币+3, 鼓励发帖交流问题。 2012-08-28 19:40:02
我也碰到过,排除了很多问题,最终也没找到确切的原因,最后还是无奈换了引物,就没问题了。由此分析应该还是引物本身的问题,或者多个结合位点,或者非特异结合,也可能是引物自身出现多聚。我也对PCR结果进行了测序,就使用了PCR引物,但是测序公司说不能结合测不出来。我对这个问题也非常好奇,如果你能找到原因,一定要告诉我呵呵。
目前看来要想解决问题,最有效的还是直接更换引物。
个性签名
3楼2012-08-28 15:36:28
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616057157

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
看看Tap酶的量,主要是引物和退火温度的问题
不曾拥有何谈失去,不必伤心!!!
4楼2012-08-28 16:02:03
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