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张玉杰

铜虫 (初入文坛)

[求助] 链霉菌转化后 提质粒验证 出现质粒上片段丢失的情况

我构建了一个 链霉菌的基因敲除载体,是双交换的。载体上位点处依次连接有左臂L、抗性标记K、右臂R 将载体转入链霉菌之后,对初步得到的转化子重新提质粒,进行验证。
PCR发现,构建到载体上的筛选标记K丢失了,就是对这个片段 做PCR 没有条带。(载体上的抗性标记A 依旧还有)。我不明白是什么原因。请各位大侠指教。
还有就是,这个片段,我用的是XbaI 酶切位点,依据我的片段测序结果,应该没有甲基化情况的发生。
请各位高人指点。谢谢
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xzx018

铁杆木虫 (著名写手)

想问下你们用的是什么宿主和载体啊
3楼2012-10-29 08:53:20
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碧海行帆

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你这个载体之前检测的时候,抗性标记还有?是不是载体构建就是不成功的
硕士毕业去找工作
2楼2012-10-25 11:06:03
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碧海行帆

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你的Xba1在抗性基因上是否有酶切位点,你验证了吧
硕士毕业去找工作
4楼2013-01-07 10:40:14
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