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链霉菌转化后 提质粒验证 出现质粒上片段丢失的情况
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我构建了一个 链霉菌的基因敲除载体，是双交换的。载体上位点处依次连接有左臂L、抗性标记K、右臂R 将载体转入链霉菌之后，对初步得到的转化子重新提质粒，进行验证。 PCR发现，构建到载体上的筛选标记K丢失了，就是对这个片段 做PCR 没有条带。（载体上的抗性标记A 依旧还有）。我不明白是什么原因。请各位大侠指教。 还有就是，这个片段，我用的是XbaI 酶切位点，依据我的片段测序结果，应该没有甲基化情况的发生。 请各位高人指点。谢谢 |
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