应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双酶切后目的条带的疑问？
51/1返回列表
查看: 4444  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

lixilei1314

金虫 (小有名气)

[求助] 双酶切后目的条带的疑问？

如何：
小弟最近在做重组质粒的双酶切，然后连接。
1，连接以后转化BL21培养基筛选，老是不长细菌，基本上平板上一个细菌都不长，不知道是什么原因？没连接好？
2，看我双酶切的条带，PET-28双酶切之后条带很暗很暗（3ul的上样量），同样，第一个和第二个的目的条带也很暗，第三个目的条带比较亮。请问各位大侠这样的条带可以割胶回收做连接吗？
3， 为什么双酶切之后，克隆载体亮度会比目的条带的亮度亮很多呢？按说他们的浓度应该是一样的啊？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-08-21 16:38:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yyk81

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lixilei1314: 金币+2, 总体系40ul，可能还是量太少了。 2012-08-22 13:28:38
酶切体系总体积是多少?上了3uL，还剩下多少?如果还剩下47uL， 全上样跑胶回收，否则重做，因为你的目的带比DL2000还弱，应该不足50ng，太少了，如果回收后这么多还有可能连接成功。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
学无止境！
3楼2012-08-22 07:43:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lixilei1314: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢，晚上就做个空载体对照看看。 2012-08-22 13:27:15
1：做个对照试验没，转一下空载体，看看长不长，然后确定是不是连接的问题
2：载体和第一、第二个目的条带，量太少了，再加上回收过程中的损失，估计会看不到了，如果你想用于做连接，那就多切点吧。第三个目的条带，看在浓度还可以
3：浓度相同，但是片段大小却不相同
赞一下 回复此楼
2楼2012-08-22 06:05:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

实心小白菜

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助，热心的虫虫 2012-08-22 15:13:28
你这是大切的验证么？可以把剩下的全跑个回收胶瞅瞅，回收的时候弄的终体积小点，然后就能浓度大点，跑个电泳看看回收后浓度，如果还有这么浅，那就能连上。如果消失了，就多切点重切吧，呼呼。而且很明显你个第一个第二个切的少了，载体才那个亮度，你指望比它短那么多的片段能多多少。
赞一下 回复此楼
有啥不高兴的事儿，说出来大家乐呵乐呵~
4楼2012-08-22 08:09:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tanglian8655

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lixilei1314: 金币+2, 第一个和第二个是同一个基因。 2012-08-22 13:30:38
你三个孔的目的基因是同一个基因吗
赞一下 回复此楼
5楼2012-08-22 11:06:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +55 医学老男孩 2026-08-13 123/6150 2026-08-19 23:44 by stan_et
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +13 kkkl_v 2026-08-19 13/650 2026-08-19 22:37 by 宝贝虫子
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +12 基诺咪客 2026-08-17 16/800 2026-08-19 22:04 by kk 的小木虫
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖？ +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +10 yuleib84 2026-08-18 11/550 2026-08-19 07:30 by 羽毛枫f
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭