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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pcr 扩不出目的带啊，求帮忙
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hxswdl

至尊木虫 (文坛精英)

Tortoise

文献杰出贡献

[求助] pcr 扩不出目的带啊，求帮忙

以基因组为模板扩得出2500多bp的片段，换引物想再加扩上游的300多bp就怎么也只能出1500bp以下的明亮条带！降低退火温度到50，2500以上有2个靠的很近很暗的带，不好切胶回收！试过降落，最终退火52与60都试过，没用啊！求高手指点！

还有个问题，用能扩出基因组的引物去扩cdna，一条带都没有！cdna 的polya前面一部分与基因组有差别，用cdna的polya前一部分碱基为下游引物，5'端开始一部分为上游引物，cdna为模板，p出来跑电泳也是空无一物，求解释啊！！（用手机编了一遍 没发成功，现在用电脑，居然还有记录，虫虫好贴心！）
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Dripping Concentrated!!energetic and active！
1楼 2012-08-18 19:24:06
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hxswdl

至尊木虫 (文坛精英)

Tortoise

文献杰出贡献
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by rainkyluo at 2012-08-23 00:15:34
出现1500bp以下的亮带可能是引物的特异性不高，建议更换引物。

多谢回帖
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Dripping Concentrated!!energetic and active！
4楼2013-11-20 00:49:41
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hxswdl

至尊木虫 (文坛精英)

Tortoise

文献杰出贡献
PS：cDNA 用18s 作为引物 验证过，不加模板的阴性对照在500bp处有较暗的带，加模板的在500bp很亮
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Dripping Concentrated!!energetic and active！
2楼2012-08-18 19:27:37
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rainkyluo

新虫 (初入文坛)
出现1500bp以下的亮带可能是引物的特异性不高，建议更换引物。
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hxswdl
3楼2012-08-23 00:15:34
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