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hxswdl

至尊木虫 (文坛精英)

Tortoise

文献杰出贡献

[求助] pcr 扩不出目的带啊,求帮忙

以基因组为模板扩得出2500多bp的片段,换引物想再加扩上游的300多bp就怎么也只能出1500bp以下的明亮条带!降低退火温度到50,2500以上有2个靠的很近很暗的带,不好切胶回收!试过降落,最终退火52与60都试过,没用啊!求高手指点!

还有个问题,用能扩出基因组的引物去扩cdna,一条带都没有!cdna 的polya前面一部分与基因组有差别,用cdna的polya前一部分碱基为下游引物,5'端开始一部分为上游引物,cdna为模板,p出来跑电泳也是空无一物,求解释啊!!(用手机编了一遍 没发成功,现在用电脑,居然还有记录,虫虫好贴心!)
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hxswdl

至尊木虫 (文坛精英)

Tortoise

文献杰出贡献

PS:cDNA 用18s 作为引物 验证过,不加模板的阴性对照在500bp处有较暗的带,加模板的在500bp很亮
Dripping Concentrated!!energetic and active!
2楼2012-08-18 19:27:37
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rainkyluo

新虫 (初入文坛)

出现1500bp以下的亮带可能是引物的特异性不高,建议更换引物。

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3楼2012-08-23 00:15:34
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hxswdl

至尊木虫 (文坛精英)

Tortoise

文献杰出贡献

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by rainkyluo at 2012-08-23 00:15:34
出现1500bp以下的亮带可能是引物的特异性不高,建议更换引物。

多谢回帖
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4楼2013-11-20 00:49:41
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