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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 长片段连接问题
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小猫三两只

金虫 (正式写手)

[交流] 长片段连接问题 已有8人参与

最近做的回收产物都连不上,所以双酶切后的产物是直接纯化后连接的,基因三千多,载体六千多,连了好久都没连上,转化后的菌斑菌P都是假的.哪位知道怎么回事啊?
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1楼 2012-08-13 10:04:30
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青菜小虫

银虫 (著名写手)

风居住的街道

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-14 13:50:52
我之前连接的片段都比你的大，载体也差不多。较大目的片段往载体上连接有一定的困难，对那些只切掉几十个碱基的载体可以不采取切胶回收的方法，而是用乙醇沉淀法回收载体，此方法使目的片段较易连接到载体上。
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生命即这般无尽变数，辗转来去皆苛求不得
2楼2012-08-13 10:45:47
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青菜小虫

银虫 (著名写手)

风居住的街道

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-15 13:39:56
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小猫三两只 at 2012-08-13 11:55:21
我也没有加收过，PCR产物及双酶切产物都是直接纯化后做的，但也是连不上。请问你最后是怎么连上的啊...

我们连接时用的是fermentats 的快速试剂盒，用乙醇沉淀法回收后连接很有效，也很神奇，呵呵我之前大片段一直连接不上，导跟我说采取这种方法我还一直将信将疑，不过实践证明确实有效哈
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生命即这般无尽变数，辗转来去皆苛求不得
9楼2012-08-14 14:24:56
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