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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助：PCR产物电泳图片怎么会这样？
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imzhanghao

木虫 (小有名气)

[求助] 求助：PCR产物电泳图片怎么会这样？

求助：PCR 400bp 左右的片段，用的是takara的ExTaq酶，结果跑电泳如图，是什么原因？另旁边的marker是2000bp的。 好像二聚体特别多。

PCR电泳图片
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1楼 2012-08-11 20:15:07
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imzhanghao

木虫 (小有名气)
imzhanghao: 回帖置顶 2012-08-13 15:08:38
首先谢谢各位的分析，我的模板浓度非常低测了只有不到2ng/ul.
而只加了2微升的模板，所以排除模板浓度高的原因。退火温度提高了5度，引物浓度降低到原来的一半，循环次数降低了还是出现了和原图一样的情况。现在只剩下可能是引物的问题了
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8楼2012-08-13 15:08:30
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robert-RBT

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励应助 2012-08-13 15:00:55
那不是引物二聚体，是非特异性扩增。好像是引物没有结合到模板上去。把退火温度和模板都降低，采用touchdown程序可能会好一些。
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2楼2012-08-12 01:48:23
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王贤卓

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-08-13 15:01:09
非特异扩增有如下原因：
引物特异性差
引物浓度过高
酶量过多
Mg2+浓度偏高
退火温度偏低
循环次数过多
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3楼2012-08-12 09:01:31
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不是引物二聚体特别多，是没有目的条带，是不是模版浓度太大了？
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jiayoubashaonian
4楼2012-08-12 14:21:30
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