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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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lxh502976898

金虫 (小有名气)

[求助] 表达载体的链接

我第一次做目的片段和表达载体的连接,从pMD-18-T将目的片段切下连接到
PET-30a上,链接过夜后乙醇沉淀这一步就没有沉淀,也盲目的家TE溶解做转化,结果没有菌长出,请高手赐教。。。。谢谢
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lxh502976898

金虫 (小有名气)

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2?: Originally posted by ghs25372216 at 2012-08-06 11:09:51
???????????????????к???????????????????10????????????7?????????1???????1????1???buffer??????????????????????????δ????????????????????TE??????????????????????? ...

你的回收浓度一般都多少ng啊 急需解决如何???高回收的浓度?
4楼2012-08-10 08:48:48
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ghs25372216

禁虫 (正式写手)

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-06 15:10:38
本帖内容被屏蔽

2楼2012-08-06 11:09:51
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lxh502976898

金虫 (小有名气)

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2?: Originally posted by ghs25372216 at 2012-08-06 11:09:51
???????????????????к???????????????????10????????????7?????????1???????1????1???buffer??????????????????????????δ????????????????????TE??????????????????????? ...

你是用的T4连接酶???  怎么??按说明书???啊
3楼2012-08-10 08:32:15
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lxh502976898

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ghs25372216 at 2012-08-06 11:09:51
我都是在目的片段浓度和酶切后载体浓度比较浓的前提下,10微升连接体系:7微升目的片段1微升载体1微升酶1微升buffer,过夜连接,然后直接进行转化,从未用乙醇沉淀过,也为加过什么TE,一直结果都很好,呵呵,个人做 ...

你用的是T4连接酶吗 为什么不按说明书上的做  还有就是你的ng数一般多大啊 如何提高DNA回收的浓度 急需赐教
5楼2012-08-10 08:57:59
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