24小时热门版块排行榜    

查看: 1707  |  回复: 16

lxh502976898

金虫 (小有名气)

[求助] 表达载体的链接

我第一次做目的片段和表达载体的连接,从pMD-18-T将目的片段切下连接到
PET-30a上,链接过夜后乙醇沉淀这一步就没有沉淀,也盲目的家TE溶解做转化,结果没有菌长出,请高手赐教。。。。谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ghs25372216

禁虫 (正式写手)

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-06 15:10:38
本帖内容被屏蔽

2楼2012-08-06 11:09:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

lxh502976898

金虫 (小有名气)

???????:
2?: Originally posted by ghs25372216 at 2012-08-06 11:09:51
???????????????????к???????????????????10????????????7?????????1???????1????1???buffer??????????????????????????δ????????????????????TE??????????????????????? ...

你是用的T4连接酶???  怎么??按说明书???啊
3楼2012-08-10 08:32:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxh502976898

金虫 (小有名气)

???????:
2?: Originally posted by ghs25372216 at 2012-08-06 11:09:51
???????????????????к???????????????????10????????????7?????????1???????1????1???buffer??????????????????????????δ????????????????????TE??????????????????????? ...

你的回收浓度一般都多少ng啊 急需解决如何???高回收的浓度?
4楼2012-08-10 08:48:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxh502976898

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ghs25372216 at 2012-08-06 11:09:51
我都是在目的片段浓度和酶切后载体浓度比较浓的前提下,10微升连接体系:7微升目的片段1微升载体1微升酶1微升buffer,过夜连接,然后直接进行转化,从未用乙醇沉淀过,也为加过什么TE,一直结果都很好,呵呵,个人做 ...

你用的是T4连接酶吗 为什么不按说明书上的做  还有就是你的ng数一般多大啊 如何提高DNA回收的浓度 急需赐教
5楼2012-08-10 08:57:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ghs25372216

禁虫 (正式写手)

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-10 13:51:03
本帖内容被屏蔽

6楼2012-08-10 10:13:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zy晨曦

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我平时用的是T4载体,10uL体系,16~20摄氏度,过夜连接
日事日毕,日清日高
7楼2012-08-12 10:05:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxh502976898

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by zy晨曦 at 2012-08-12 10:05:12
我平时用的是T4载体,10uL体系,16~20摄氏度,过夜连接

你的体系怎么安排的  目的基因和载体的量是多少  还有胶回收的浓度是多少  我每次回收的都挺低 急需帮助
8楼2012-08-13 09:52:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zy晨曦

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

回收胶浓度:百分之一点二
10微升连接体系:7微升目的基因,1微升buffer,1微升载体,1微升酶
日事日毕,日清日高
9楼2012-08-15 17:36:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiemin217

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ghs25372216 at 2012-08-06 11:09:51
我都是在目的片段浓度和酶切后载体浓度比较浓的前提下,10微升连接体系:7微升目的片段1微升载体1微升酶1微升buffer,过夜连接,然后直接进行转化,从未用乙醇沉淀过,也为加过什么TE,一直结果都很好,呵呵,个人做 ...

,也是怎么干的,长的巨好,是手气好,呵呵
10楼2012-08-15 20:36:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lxh502976898 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +10 布布和一二 2026-08-08 18/900 2026-08-09 15:14 by zxy7909
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +3 布布和一二 2026-08-08 3/150 2026-08-08 18:15 by Lightingo
[基金申请] 好奇怪的filecode +3 布布和一二 2026-08-08 4/200 2026-08-08 17:46 by zhanghaozhu
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 4/200 2026-08-08 17:27 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 5/250 2026-08-08 17:02 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:47 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 5/250 2026-08-08 16:27 by oEVWOejN9taj
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:27 by oEVWOejN9taj
[博后之家] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:02 by oEVWOejN9taj
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:47 by oEVWOejN9taj
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:39 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 4/200 2026-08-08 14:27 by oEVWOejN9taj
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:27 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:07 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
信息提示
请填处理意见