应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 有做过荧光定量PCR的吗？
101/1返回列表
查看: 2552  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

小石头2007

金虫 (正式写手)

[交流] 有做过荧光定量PCR的吗？ 已有7人参与

我要准备做荧光定量PCR，目的基因长度136bp，用普通PCR扩增，目的条带单一，没有非特异性扩增，但是引物二聚体比较多。这样的引物用来做荧光定量效果会好吗？
再有，提取的RNA质量对于后期荧光定量PCR有影响吗？我提的RNA的OD260/280比值在1.8-2.0之间，但是OD260/230的比值一直偏小，大概在1左右。这样的RNA能用来反转录，并作荧光定量PCR吗？

[ Last edited by 小石头2007 on 2012-8-23 at 20:44 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-07-25 15:12:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chlorella409

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
wizardfan: 金币+2, 经验之谈 2012-08-19 04:46:20
要看你荧光定量用什么方法了，SYBR的话绝对不可以，引物二聚体也会有很强的荧光信号，用探针的话，只要探针设计得当，引物二聚体对此是不会有影响的
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-25 16:59:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小石头2007

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chlorella409 at 2012-07-25 16:59:00
要看你荧光定量用什么方法了，SYBR的话绝对不可以，引物二聚体也会有很强的荧光信号，用探针的话，只要探针设计得当，引物二聚体对此是不会有影响的

我用的就是SYBR
回复此楼
3楼2012-07-27 13:57:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chlorella409

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小石头2007 at 2012-07-27 13:57:07
我用的就是SYBR...

那你还是赶快换引物吧，SYBR只要有扩增就会发出荧光，不管是你目的片段还是引物二聚体，他没有特异性的，我们之前做的时候也是发现有引物二聚体，就放弃这种方法了
赞一下 回复此楼
4楼2012-07-27 14:18:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lanhanh

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看天: 金币+2, 鼓励交流 常来 2012-08-19 08:27:22
real time pcr 算是比较容易的吧 我以前作的死SYBR
赞一下 回复此楼
5楼2012-07-27 16:53:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhudongyang

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看天: 金币+2, 鼓励交流 常来 2012-08-19 08:27:27
用SYBR做real time pcr   引物至关重要，建议多设计几对引物，再进行筛选
赞一下 回复此楼
6楼2012-08-18 22:09:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snowsun04006
7楼2012-09-29 04:09:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看天: 金币+2, 鼓励交流 常来 2012-09-29 09:46:39
引物很重要，引物二聚体对结果影响很大，做出的CT值数根本不准。多设计几对引物选一对最好的做。RNA的质量还是很重要的。经过DNase处理后A260/280~2。如果DNA处理不干净是不行的，做反转录的时候要做负对照。A260/230最好在2，就我的经验来看，稍微低一点问题不是很大。
赞一下 回复此楼
8楼2012-09-29 09:20:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看天: 金币+2, 鼓励交流 常来 2012-09-29 09:46:46
楼主，你可以做一下看，因为普通PCR 引物浓度是25mM左右，而QPCR引物浓度是3mM, 而二者的BUFFER 也不一样，即使普通PCR很好，QPCR也不一定就适用，而普通PCR结果不太好的引物做QPCR有时结果会很好。
赞一下 回复此楼
9楼2012-09-29 09:32:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

于熊宝

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
RNA的OD260/280比值在1.8-2.0  说明RNA 浓度很高了。。。。  我做的最高也就达到过2,1
  PCR反应底物是DNA，，，RNA做RT-PCR得到的， 不是一回事   
  不过提取的RNA纯度  和 比值  均一 最重要
赞一下 回复此楼
to be , or not to be , that is a question...
10楼2012-09-29 20:57:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小石头2007 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 i3cz6qj6l2 2026-02-17 3/150 2026-02-18 11:09 by lqtl9djx19
[考博] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 i3cz6qj6l2 2026-02-17 3/150 2026-02-18 10:54 by lqtl9djx19
[考研] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 i3cz6qj6l2 2026-02-17 3/150 2026-02-18 10:39 by lqtl9djx19
[考研] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-18 08:53 by lqtl9djx19
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-18 08:38 by lqtl9djx19
[找工作] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-17 4/200 2026-02-18 07:55 by lotyj5cz79
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:40 by lotyj5cz79
[考研] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:38 by lotyj5cz79
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:23 by lotyj5cz79
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:08 by lotyj5cz79
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-16 3/150 2026-02-18 06:53 by lotyj5cz79
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-18 00:40 by tk2gfblvuz
[找工作] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 4/200 2026-02-18 00:23 by tk2gfblvuz
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-17 23:40 by tk2gfblvuz
[基金申请] 基金正文30页指的是报告正文还是整个申请书 +3 successhe 2026-02-16 4/200 2026-02-17 20:56 by successhe
[基金申请] 今年春晚有几个节目很不错，点赞！ +5 瞬息宇宙 2026-02-16 6/300 2026-02-17 12:49 by jymy19840415
[微米和纳米] 球磨粉体时遇到了大的问题，请指教！ 10+3 6sbiam 2026-02-12 15/750 2026-02-16 15:03 by tgzxzqj
[基金申请] 过年走亲戚时感受到了所开私家车的鄙视链 +3 瞬息宇宙 2026-02-15 5/250 2026-02-16 14:23 by aspect3000
[基金申请] 情人节自我反思：在爱情中有过遗憾吗？ +4 瞬息宇宙 2026-02-15 5/250 2026-02-15 22:28 by baiboxie
[硕博家园] 江汉大学解明教授课题组招博士研究生/博士后 +3 cleverlyy 2026-02-12 3/150 2026-02-12 21:02 by qsdf1
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭