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dzwd

金虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量PCR 如何做到定量呢?

我要做RT-qPCR,第一步是提取植物内的总RNA,这里出现个问题,参考步骤里边写的是取0.1g叶片,这个0.1怎么取啊?研磨的时候选用的是液氮,研钵上粘的满哪都是,我纠结了,有做过的吗?你们用的什么方法啊!望不吝赐教!!
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zgb1982

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
dzwd: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2012-05-09 14:53:22
这个量没必要那么精确啦,差不多就行了,反正还要有内参的
2楼2012-05-09 14:49:06
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dzwd

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zgb1982 at 2012-05-09 14:49:06:
这个量没必要那么精确啦,差不多就行了,反正还要有内参的

原来如此!
3楼2012-05-09 14:53:16
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

做反转录的时候,不同的样品使用同样量的RNA就可以啦。然后做PCR时使用同样量的cDNA做模板,最后,还有内参来矫正模板量差异。
4楼2012-05-09 17:33:47
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dzwd

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-05-09 17:33:47:
做反转录的时候,不同的样品使用同样量的RNA就可以啦。然后做PCR时使用同样量的cDNA做模板,最后,还有内参来矫正模板量差异。

我是这么理解的,你看对不对哈。我要测定的是RNA表达量,首先得是取相同量的植物叶片,然后看下RNA量的多少,感觉这样才有意义啊!我先去仔细看看方法步骤吧,自己理解有误?
5楼2012-05-10 08:13:59
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

引用回帖:
5楼: Originally posted by dzwd at 2012-05-10 08:13:59:
我是这么理解的,你看对不对哈。我要测定的是RNA表达量,首先得是取相同量的植物叶片,然后看下RNA量的多少,感觉这样才有意义啊!我先去仔细看看方法步骤吧,自己理解有误?

是这样的,每一步都最好保证同样量,取叶片时当然也是。不过就算完全一样的样品分成两份来提,得到的RNA的量也会有所差异的。
6楼2012-05-10 15:33:19
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