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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量PCR 如何做到定量呢？
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dzwd

金虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量PCR 如何做到定量呢？

我要做RT-qPCR，第一步是提取植物内的总RNA，这里出现个问题，参考步骤里边写的是取0.1g叶片，这个0.1怎么取啊？研磨的时候选用的是液氮，研钵上粘的满哪都是，我纠结了，有做过的吗？你们用的什么方法啊！望不吝赐教！！
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1楼 2012-05-09 14:20:23
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zgb1982

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dzwd: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2012-05-09 14:53:22
这个量没必要那么精确啦，差不多就行了，反正还要有内参的
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2楼2012-05-09 14:49:06
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dzwd

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zgb1982 at 2012-05-09 14:49:06:
这个量没必要那么精确啦，差不多就行了，反正还要有内参的

原来如此！
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3楼2012-05-09 14:53:16
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
做反转录的时候，不同的样品使用同样量的RNA就可以啦。然后做PCR时使用同样量的cDNA做模板，最后，还有内参来矫正模板量差异。
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4楼2012-05-09 17:33:47
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dzwd

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-05-09 17:33:47:
做反转录的时候，不同的样品使用同样量的RNA就可以啦。然后做PCR时使用同样量的cDNA做模板，最后，还有内参来矫正模板量差异。

我是这么理解的，你看对不对哈。我要测定的是RNA表达量，首先得是取相同量的植物叶片，然后看下RNA量的多少，感觉这样才有意义啊！我先去仔细看看方法步骤吧，自己理解有误？
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5楼2012-05-10 08:13:59
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by dzwd at 2012-05-10 08:13:59:
我是这么理解的，你看对不对哈。我要测定的是RNA表达量，首先得是取相同量的植物叶片，然后看下RNA量的多少，感觉这样才有意义啊！我先去仔细看看方法步骤吧，自己理解有误？

是这样的，每一步都最好保证同样量，取叶片时当然也是。不过就算完全一样的样品分成两份来提，得到的RNA的量也会有所差异的。
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6楼2012-05-10 15:33:19
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