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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量pcr
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消锦lzhy

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量pcr

最近做了一次荧光定量pcr，遇到一些问题，请求高人指点：

    做普通pcr用takara的mightyamp酶能扩增出较好的条带，所以做荧光定量pcr也用含有该酶的试剂，结果做出来的结果很不理想。空白Ct值24左右，拷贝数低于10的4次方都跟空白差不多。说明书也讲该酶不太适合做标准曲线，建议标曲用Ex Taq 酶，但是我之前做普通pcr试过Ex taq酶，电泳检测没有条带，所以非常担心换用含有Ex Taq酶的试剂做定量做不出来。由于做定量成本较高，虽有此怀疑又不敢轻易尝试，求高人指点迷津。
荧光定量结果电泳检测如下图：

标准品，从左到右依次10倍稀释（第三个空没有样品）



左边三个是阴性对照，右边三个是不加引物只加模板的空白对照
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1楼 2012-04-09 15:35:24
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love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是染料法的还是探针法的？
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2楼2012-04-09 16:04:04
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消锦lzhy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by love_st at 2012-04-09 16:04:04:
是染料法的还是探针法的？

染料法
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3楼2012-04-09 16:31:49
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消锦lzhy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by love_st at 2012-04-09 16:04:04:
是染料法的还是探针法的？

sybr green
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4楼2012-04-09 16:33:32
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