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消锦lzhy

新虫 (初入文坛)


[求助] 荧光定量pcr

最近做了一次荧光定量pcr,遇到一些问题,请求高人指点:

    做普通pcr用takara的mightyamp酶能扩增出较好的条带,所以做荧光定量pcr也用含有该酶的试剂,结果做出来的结果很不理想。空白Ct值24左右,拷贝数低于10的4次方都跟空白差不多。说明书也讲该酶不太适合做标准曲线,建议标曲用Ex Taq 酶,但是我之前做普通pcr试过Ex taq酶,电泳检测没有条带,所以非常担心换用含有Ex Taq酶的试剂做定量做不出来。由于做定量成本较高,虽有此怀疑又不敢轻易尝试,求高人指点迷津。
荧光定量结果电泳检测如下图:

标准品,从左到右依次10倍稀释(第三个空没有样品)



左边三个是阴性对照,右边三个是不加引物只加模板的空白对照
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love_st

金虫 (著名写手)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是染料法的还是探针法的?
2楼2012-04-09 16:04:04
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消锦lzhy

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
2楼: Originally posted by love_st at 2012-04-09 16:04:04:
是染料法的还是探针法的?

染料法
3楼2012-04-09 16:31:49
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消锦lzhy

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
2楼: Originally posted by love_st at 2012-04-09 16:04:04:
是染料法的还是探针法的?

sybr green
4楼2012-04-09 16:33:32
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