24小时热门版块排行榜    

查看: 5251  |  回复: 16
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xingfuxiaoyu

新虫 (初入文坛)

[求助] western 中,目的蛋白没有,但是Marker 暴出来了,什么原因啊

各位虫友:
       我最近在做Western 实验,奇怪的是,目的蛋白没出来,Marker 和一些很大分子量的杂蛋白暴出来了,到底是什么原因啊?
       1. 我把ECL 染液滴到二抗上,它会发光,而且有杂蛋白暴出来,说明染液和二抗也没问题吧?      
       2.我在转膜后,用立春红对NC膜进行了染色,条带很清晰,对转膜后的凝胶用考马斯亮蓝进行染色,条带很弱, 说明我的转膜是成功的。
      3.我用1:1000的比例稀释一抗,在  4度下孵育过夜,第二天在孵育二抗,进行后续实验。
      4.在滴上显色液后,MARKER 位置上会显示很亮的荧光,可其余地方没有,就让我很奇怪。
       自己初学,没什么经验,希望得到大家的指导,谢谢
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生物学

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by xingfuxiaoyu at 2012-07-20 23:26:44
我的MARKER没有带标记,只是普通的,只起指示作用,但就是把ECL 发光液滴上之后,MARKER 的位置会有亮亮的荧光,暴出来条带是模糊一片,其余就是杂蛋白比较多,我不太明白你说的Marker是污染了目的蛋白了?想讨教下 ...

你的Marker位置怎么会发出荧光呢?是不是背景呀?我以前也是做出来整个模糊的一片,但是后来发现是一抗稀释倍数太高了,所以我降低了倍数之后就OK了,建议多试试
8楼2012-07-21 17:41:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

84146922

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-20 13:49:43
1:首先你使用的一抗是什么,说明书上应该有他的最佳稀释比例和孵育时间。
2.marker也有杂带,请问下你,使用封闭的方法是什么呢,是不是封闭出现了问题?
2楼2012-07-20 11:50:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的Marker是带有标记的吗?如果不是,Marker怎么会发出荧光呢?你的Marker是污染了目的蛋白了吗?还有,你说的Marker发出荧光是什么样子的?条带还是糊成一片?ECL的底物如果能和二抗发生反应并产生荧光,说明这两个是没有问题的
3楼2012-07-20 16:50:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ankang0910

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
western出问题最可能就是你的一抗don't work。你的一抗是不是用过很多次了,或者失效了?另外western暴出MARKER来是很正常的现象,更能说明你的目的蛋白的抗体不是很好。
实验顺利!!
4楼2012-07-20 20:02:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 301求调剂 +5 yy要上岸呀 2026-03-17 5/250 2026-03-17 20:20 by peike
[考研] 材料专硕326求调剂 +6 墨煜姒莘 2026-03-15 7/350 2026-03-17 17:10 by ruiyingmiao
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] 本人考085602 化学工程 专硕 +16 不知道叫什么! 2026-03-15 18/900 2026-03-17 17:05 by ruiyingmiao
[基金申请] 被我言中:新模板不强调格式了,假专家开始管格式了 +3 beefly 2026-03-14 3/150 2026-03-17 16:45 by RRRKKK
[考研] 一志愿苏州大学材料工程(085601)专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +6 大火山小火山 2026-03-16 8/400 2026-03-17 15:05 by 无懈可击111
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +7 邱gl 2026-03-11 8/400 2026-03-17 09:36 by 努力学习赚彩礼
[考研] 化学调剂0703 +8 啊我我的 2026-03-11 8/400 2026-03-16 17:23 by 我的船我的海
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-14 3/150 2026-03-16 16:39 by houyaoxu
[考研] 326求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-15 3/150 2026-03-16 07:33 by Iveryant
[考研] 材料工程327求调剂 +3 xiaohe12w 2026-03-11 3/150 2026-03-14 20:20 by ms629
[基金申请] 现在如何回避去年的某一个专家,不知道名字 +3 zk200107 2026-03-12 6/300 2026-03-14 17:13 by zk200107
[考研] 复试调剂 +3 呼呼?~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
[考研] 材料080500调剂求收留 +3 一颗meteor 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:54 by peike
[考研] 308 085701 四六级已过求调剂 +7 温乔乔乔乔 2026-03-12 14/700 2026-03-14 10:49 by JourneyLucky
[考研] 招收0805(材料)调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
[考研] 材料与化工求调剂一志愿 985 总分 295 +8 dream…… 2026-03-12 8/400 2026-03-13 22:17 by 星空星月
[考研] 四川大学085601材料工程专硕 初试294求调剂 +4 祝我们好在冬天 2026-03-11 4/200 2026-03-13 21:39 by peike
[考研] 315求调剂 +9 小羊小羊_ 2026-03-11 10/500 2026-03-13 21:13 by SXNU李老师
[考研] 290求调剂 +3 ADT 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:19 by peike
信息提示
请填处理意见