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xingfuxiaoyu

新虫 (初入文坛)

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[求助] western 中，目的蛋白没有，但是Marker 暴出来了，什么原因啊

各位虫友：
   我最近在做Western 实验，奇怪的是，目的蛋白没出来，Marker 和一些很大分子量的杂蛋白暴出来了，到底是什么原因啊？
   1. 我把ECL 染液滴到二抗上，它会发光，而且有杂蛋白暴出来，说明染液和二抗也没问题吧？
   2.我在转膜后，用立春红对NC膜进行了染色，条带很清晰，对转膜后的凝胶用考马斯亮蓝进行染色，条带很弱，说明我的转膜是成功的。
   3.我用1：1000的比例稀释一抗，在  4度下孵育过夜，第二天在孵育二抗，进行后续实验。
   4.在滴上显色液后，MARKER 位置上会显示很亮的荧光，可其余地方没有，就让我很奇怪。
   自己初学，没什么经验，希望得到大家的指导，谢谢

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1楼 2012-07-19 23:45:10

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jl860822

金虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

引用回帖:

6楼: Originally posted by xingfuxiaoyu at 2012-07-20 23:26:44
我的MARKER没有带标记，只是普通的，只起指示作用，但就是把ECL 发光液滴上之后，MARKER 的位置会有亮亮的荧光，暴出来条带是模糊一片，其余就是杂蛋白比较多，我不太明白你说的Marker是污染了目的蛋白了？想讨教下 ...

你的Marker位置怎么会发出荧光呢？是不是背景呀？我以前也是做出来整个模糊的一片，但是后来发现是一抗稀释倍数太高了，所以我降低了倍数之后就OK了，建议多试试