应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » western 中，目的蛋白没有，但是Marker 暴出来了，什么原因啊
51/1返回列表
查看: 5941  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xingfuxiaoyu

新虫 (初入文坛)

[求助] western 中，目的蛋白没有，但是Marker 暴出来了，什么原因啊

各位虫友：
       我最近在做Western 实验，奇怪的是，目的蛋白没出来，Marker 和一些很大分子量的杂蛋白暴出来了，到底是什么原因啊？
       1. 我把ECL 染液滴到二抗上，它会发光，而且有杂蛋白暴出来，说明染液和二抗也没问题吧？      
       2.我在转膜后，用立春红对NC膜进行了染色，条带很清晰，对转膜后的凝胶用考马斯亮蓝进行染色，条带很弱， 说明我的转膜是成功的。
      3.我用1：1000的比例稀释一抗，在  4度下孵育过夜，第二天在孵育二抗，进行后续实验。
      4.在滴上显色液后，MARKER 位置上会显示很亮的荧光，可其余地方没有，就让我很奇怪。
       自己初学，没什么经验，希望得到大家的指导，谢谢
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生物学

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-07-19 23:45:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by xingfuxiaoyu at 2012-07-20 23:26:44
我的MARKER没有带标记，只是普通的，只起指示作用，但就是把ECL 发光液滴上之后，MARKER 的位置会有亮亮的荧光，暴出来条带是模糊一片，其余就是杂蛋白比较多，我不太明白你说的Marker是污染了目的蛋白了？想讨教下 ...

你的Marker位置怎么会发出荧光呢？是不是背景呀？我以前也是做出来整个模糊的一片，但是后来发现是一抗稀释倍数太高了，所以我降低了倍数之后就OK了，建议多试试
赞一下 回复此楼
8楼2012-07-21 17:41:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

84146922

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-20 13:49:43
1：首先你使用的一抗是什么，说明书上应该有他的最佳稀释比例和孵育时间。
2.marker也有杂带，请问下你，使用封闭的方法是什么呢，是不是封闭出现了问题？
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-20 11:50:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的Marker是带有标记的吗？如果不是，Marker怎么会发出荧光呢？你的Marker是污染了目的蛋白了吗？还有，你说的Marker发出荧光是什么样子的？条带还是糊成一片？ECL的底物如果能和二抗发生反应并产生荧光，说明这两个是没有问题的
赞一下 回复此楼
3楼2012-07-20 16:50:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ankang0910

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
western出问题最可能就是你的一抗don't work。你的一抗是不是用过很多次了，或者失效了？另外western暴出MARKER来是很正常的现象，更能说明你的目的蛋白的抗体不是很好。
赞一下 回复此楼
实验顺利！！
4楼2012-07-20 20:02:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 10/500 2026-11-09 08:00 by IhnEQauGmT3K
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 13/650 2026-11-09 06:50 by l48hFd8Nwae2
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 12/600 2026-11-09 05:26 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-09 00:14 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 延安大学回应“副教授留绝笔信”：确已离世，正核实举报内容 +3 yexuqing 2026-11-04 5/250 2026-11-07 13:22 by 苏东坡二世
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 23/1150 2026-11-07 06:49 by Equinoxhua
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +10 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 17:18 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 14/700 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:23 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 11/550 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:11 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-06 02:24 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:15 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:53 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭