24小时热门版块排行榜    

查看: 5238  |  回复: 16
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xingfuxiaoyu

新虫 (初入文坛)

[求助] western 中,目的蛋白没有,但是Marker 暴出来了,什么原因啊

各位虫友:
       我最近在做Western 实验,奇怪的是,目的蛋白没出来,Marker 和一些很大分子量的杂蛋白暴出来了,到底是什么原因啊?
       1. 我把ECL 染液滴到二抗上,它会发光,而且有杂蛋白暴出来,说明染液和二抗也没问题吧?      
       2.我在转膜后,用立春红对NC膜进行了染色,条带很清晰,对转膜后的凝胶用考马斯亮蓝进行染色,条带很弱, 说明我的转膜是成功的。
      3.我用1:1000的比例稀释一抗,在  4度下孵育过夜,第二天在孵育二抗,进行后续实验。
      4.在滴上显色液后,MARKER 位置上会显示很亮的荧光,可其余地方没有,就让我很奇怪。
       自己初学,没什么经验,希望得到大家的指导,谢谢
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生物学

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ankang0910

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
western出问题最可能就是你的一抗don't work。你的一抗是不是用过很多次了,或者失效了?另外western暴出MARKER来是很正常的现象,更能说明你的目的蛋白的抗体不是很好。
实验顺利!!
4楼2012-07-20 20:02:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

84146922

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-20 13:49:43
1:首先你使用的一抗是什么,说明书上应该有他的最佳稀释比例和孵育时间。
2.marker也有杂带,请问下你,使用封闭的方法是什么呢,是不是封闭出现了问题?
2楼2012-07-20 11:50:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的Marker是带有标记的吗?如果不是,Marker怎么会发出荧光呢?你的Marker是污染了目的蛋白了吗?还有,你说的Marker发出荧光是什么样子的?条带还是糊成一片?ECL的底物如果能和二抗发生反应并产生荧光,说明这两个是没有问题的
3楼2012-07-20 16:50:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xingfuxiaoyu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 84146922 at 2012-07-20 11:50:50
1:首先你使用的一抗是什么,说明书上应该有他的最佳稀释比例和孵育时间。
2.marker也有杂带,请问下你,使用封闭的方法是什么呢,是不是封闭出现了问题?

我用的一抗是新买的兔抗人的TPA 的多克隆抗体,TPA 是我的目的蛋白,说明书只有稀释范围,没有孵育时间,这些都需要摸条件,但是现在的结果让我摸不着头绪。封闭是用5%的脱脂奶粉用TBST 稀释封闭的,常温下一小时,今天我已经多加了半小时,不知道明天结果怎么样,就是不明白问题出哪了呵呵
5楼2012-07-20 23:21:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学336分求调剂 +3 zbzihdhd 2026-03-15 4/200 2026-03-16 23:52 by zbzihdhd
[考研] 一志愿苏州大学材料工程(085601)专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +3 大火山小火山 2026-03-16 5/250 2026-03-16 16:54 by barlinike
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
[考研] 材料与化工一志愿南昌大学327求调剂推荐 +7 Ncdx123456 2026-03-13 8/400 2026-03-16 12:15 by karry wen
[考研] 274求调剂 +4 时间点 2026-03-13 4/200 2026-03-15 15:29 by Rambo13
[考研] 材料工程327求调剂 +3 xiaohe12w 2026-03-11 3/150 2026-03-14 20:20 by ms629
[考研] 【0703化学调剂】-一志愿华中师范大学-六级475 +5 Becho359 2026-03-11 5/250 2026-03-14 11:35 by 哦哦123
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-03-13 4/200 2026-03-14 08:37 by zhukairuo
[考研] 材料工程,326分,求调剂 +6 KRSLSR 2026-03-10 6/300 2026-03-13 23:47 by JourneyLucky
[考研] 0805,333求调剂 +3 112253525 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:42 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +6 邱gl 2026-03-12 7/350 2026-03-13 23:24 by 邱gl
[考研] 材料工程调剂 +9 咪咪空空 2026-03-12 9/450 2026-03-13 22:05 by 星空星月
[考研] 求材料调剂 085600英一数二总分302 前三科235 精通机器学习 一志愿哈工大 +4 林yaxin 2026-03-12 4/200 2026-03-13 22:04 by 星空星月
[考研] [0860]321分求调剂,ab区皆可 +4 宝贵热 2026-03-13 4/200 2026-03-13 22:01 by 星空星月
[考研] 315求调剂 +9 小羊小羊_ 2026-03-11 10/500 2026-03-13 21:13 by SXNU李老师
[考研] 274求调剂 +3 S.H1 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:15 by JourneyLucky
[考研] 296求调剂 +3 大口吃饭 身体健 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:31 by 学员8dgXkO
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
[考研] 085600 材料与化工 295 求调剂 +10 dream…… 2026-03-10 12/600 2026-03-12 13:46 by dream……
信息提示
请填处理意见