24小时热门版块排行榜    

查看: 5241  |  回复: 16
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xingfuxiaoyu

新虫 (初入文坛)

[求助] western 中,目的蛋白没有,但是Marker 暴出来了,什么原因啊

各位虫友:
       我最近在做Western 实验,奇怪的是,目的蛋白没出来,Marker 和一些很大分子量的杂蛋白暴出来了,到底是什么原因啊?
       1. 我把ECL 染液滴到二抗上,它会发光,而且有杂蛋白暴出来,说明染液和二抗也没问题吧?      
       2.我在转膜后,用立春红对NC膜进行了染色,条带很清晰,对转膜后的凝胶用考马斯亮蓝进行染色,条带很弱, 说明我的转膜是成功的。
      3.我用1:1000的比例稀释一抗,在  4度下孵育过夜,第二天在孵育二抗,进行后续实验。
      4.在滴上显色液后,MARKER 位置上会显示很亮的荧光,可其余地方没有,就让我很奇怪。
       自己初学,没什么经验,希望得到大家的指导,谢谢
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生物学

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xingfuxiaoyu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ankang0910 at 2012-07-20 20:02:07
western出问题最可能就是你的一抗don't work。你的一抗是不是用过很多次了,或者失效了?另外western暴出MARKER来是很正常的现象,更能说明你的目的蛋白的抗体不是很好。

一抗是新买的,所以我纠结啊嘿嘿
7楼2012-07-20 23:27:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

84146922

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-20 13:49:43
1:首先你使用的一抗是什么,说明书上应该有他的最佳稀释比例和孵育时间。
2.marker也有杂带,请问下你,使用封闭的方法是什么呢,是不是封闭出现了问题?
2楼2012-07-20 11:50:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的Marker是带有标记的吗?如果不是,Marker怎么会发出荧光呢?你的Marker是污染了目的蛋白了吗?还有,你说的Marker发出荧光是什么样子的?条带还是糊成一片?ECL的底物如果能和二抗发生反应并产生荧光,说明这两个是没有问题的
3楼2012-07-20 16:50:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ankang0910

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
western出问题最可能就是你的一抗don't work。你的一抗是不是用过很多次了,或者失效了?另外western暴出MARKER来是很正常的现象,更能说明你的目的蛋白的抗体不是很好。
实验顺利!!
4楼2012-07-20 20:02:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨; 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 0703化学调剂,求各位老师收留 +8 秋有木北 2026-03-14 8/400 2026-03-16 15:21 by 哦哦123
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +13 enenenhui 2026-03-13 14/700 2026-03-16 15:19 by 了了了了。。
[教师之家] 焦虑 +7 水冰月月野兔 2026-03-13 9/450 2026-03-16 10:00 by Quakerbird
[考研] 311求调剂 +6 冬十三 2026-03-15 6/300 2026-03-16 08:00 by wang_dand
[考研] 326求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-15 3/150 2026-03-16 07:33 by Iveryant
[考研] 312求调剂 +6 陌宸希 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:40 by JourneyLucky
[考研] 285 求调剂 资源与环境 一志愿北京化工大学 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:04 by JourneyLucky
[考研] 337一志愿华南理工0805材料求调剂 +7 mysdl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 22:43 by JourneyLucky
[考研] 求材料调剂 085600英一数二总分302 前三科235 精通机器学习 一志愿哈工大 +4 林yaxin 2026-03-12 4/200 2026-03-13 22:04 by 星空星月
[考研] 一志愿西南交大,材料专硕317求调剂 +5 lx8568 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:43 by peike
[考研] 0703化学一志愿211 总分320求调剂 +5 玛卡巴卡啊哈 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:40 by JourneyLucky
[考研] 四川大学085601材料工程专硕 初试294求调剂 +4 祝我们好在冬天 2026-03-11 4/200 2026-03-13 21:39 by peike
[考研] 工科,求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +7 ADT 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:17 by JourneyLucky
[考研] 26考研求调剂 +5 丶宏Sir 2026-03-13 5/250 2026-03-13 13:05 by JourneyLucky
[考研] 085600 材料与化工 295 求调剂 +10 dream…… 2026-03-10 12/600 2026-03-12 13:46 by dream……
[考研] 0703化学调剂 +3 三dd. 2026-03-10 3/150 2026-03-10 15:45 by peike
信息提示
请填处理意见