应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR回收产物做PCR模板，为什么扩不出来
91/1返回列表
查看: 4597  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

小番茄

金虫 (小有名气)

[求助] PCR回收产物做PCR模板，为什么扩不出来 已有1人参与

请教各位虫子，是否模板加多了，PCR也会扩增不出条带？
我用质粒为模板，选用一对引物扩增目的片段，胶回收，第二次想再扩增目的片段，就直接用胶回收的产物（2μL跑电泳比较亮），稀释10倍后加了0.5μL ，但是没有目的条带，再用质粒做模板就能扩增出来，是我模板加多了吗？请教各位虫有!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-07-15 11:23:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 回帖置顶 2012-07-15 19:46:20
小番茄: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-07-17 09:57:54
二次pcr扩增不出条带来挺正常的，这与引物的结合效率有关，当然也可能是elution buffer中的离子抑制了pcr反应，建议用无菌水洗脱，还有，最好是优化一下pcr条件，一次多p几管，多回收，避免二次pcr
赞一下 回复此楼
coasttocoast。
3楼2012-07-15 12:41:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-07-16 13:40:35
小番茄: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-07-17 09:57:45
首先你得确认一下两次用的引物是一样的；然后确定一下你的胶回收过程有没有问题，回收完之后，你可以跑胶检测一下，如果没有条带，可能你的回收过程有问题，如果有，你最好确定一下到底是不是你的目的产物；最后就是你的模板浓度可能是稍微有点高，你可以稀释100倍，去1μl做模板，多想想办法吧，相信实验一定会做出来的
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-15 11:58:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-07-16 13:40:52
根据我自己的经验，就是模版太多了，我用PCR产物做模版时，都是最少稀释50倍，然后加0.5uL。所以建议你将PCR产物多稀释几个梯度后再做。
赞一下 回复此楼
4楼2012-07-15 14:14:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

野草倚南墙

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-07-16 13:41:03
楼主，根据我的经验，（我通常用试剂盒收产物30μl）在确定pcr产物回收没问题，点检大小和亮度正常，建议楼主直接取2μlpcr产物在100体系下扩增。按原来条件试一试，因该会有。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2012-07-15 23:34:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

84146922

金虫 (小有名气)
二次PCR效果不如一次PCR好，引物的结合效率不高，建议多P几管.
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2012-07-16 08:36:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Richard_TXC
7楼2012-11-30 15:24:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

身未动

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 84146922 at 2012-07-16 08:36:37
二次PCR效果不如一次PCR好，引物的结合效率不高，建议多P几管.

请教;为什么引物结合效率会降低？
赞一下 回复此楼
天道酬勤
8楼2014-09-21 23:44:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小傻瓜@静子

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

一般胶回收回收成20μl，可以直接拿来PCR，加的时候加0.5μl作为模板，是没有问题的
赞一下 回复此楼
9楼2014-09-22 14:47:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小番茄 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 5/250 2026-11-13 11:37 by Equinoxhua
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +8 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 9/450 2026-11-13 11:11 by Equinoxhua
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 4/200 2026-11-12 12:51 by ECLTXnJnRSXf
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 7/350 2026-11-12 11:33 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 8/400 2026-11-12 11:22 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +7 czAiolzR0IJC 2026-11-10 9/450 2026-11-12 11:00 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:38 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 5/250 2026-11-12 10:38 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 8/400 2026-11-12 10:27 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 10/500 2026-11-12 09:52 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 FChKX8meu1ds 2026-11-09 8/400 2026-11-12 09:41 by HajghKOMynmz
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +8 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 12/600 2026-11-12 09:32 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +8 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 12/600 2026-11-12 09:32 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +8 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 12/600 2026-11-12 09:21 by HajghKOMynmz
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 9/450 2026-11-12 09:21 by HajghKOMynmz
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 5/250 2026-11-12 08:15 by HajghKOMynmz
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 5/250 2026-11-12 06:14 by 9fOTqj074tIg
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 5/250 2026-11-12 06:03 by 9fOTqj074tIg
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 7/350 2026-11-12 05:30 by 9fOTqj074tIg
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 6/300 2026-11-11 17:03 by TgvkbZZl9tqB
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭