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jialemon

新虫 (初入文坛)

[交流] 毕赤表达，有些有酶活无蛋白，有些有蛋白没有酶活 已有5人参与

最近用ppic9K和GS115做酶基因表达，挑取几个菌落做甲醇诱导表达，48h取样测酶活并跑SDS-PAGE，结果非常奇怪，有些没有酶活但又条带，但有些没有酶活却有目的蛋白条带，不过也有正常的（有酶活有条带）。有懂得能否指导一下，很纠结。
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1楼 2012-07-14 12:25:11
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

hzlatqh

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-07-16 13:39:49
有酶活没蛋白：
1可能是有些蛋白表达量不高吧，所以SDSPAGE看不出来，但活性是有的。
2或者目标蛋白没有以预期大小表达出来，但酶活还是存在。可以做个western试试。

有蛋白没酶活：
1说明这个蛋白容易失活，至少在你的试验条件下容易失活。
2可能蛋白活性需要某些辅酶，而异源表达情况下没有。。。
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jialemon
两个黄鹂鸣翠柳，一行白鹭上青天
4楼2012-07-15 13:20:28
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普通回帖

jialemon

新虫 (初入文坛)
肿么没有人回复呀，求救呀
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2楼2012-07-14 20:17:51
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waiter

木虫 (著名写手)

蛋白层析系统（国产）销售
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
帮忙顶了。顺便 请问你有km71h吗？
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3楼2012-07-15 11:30:25
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84146922

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-16 13:40:02
1.有酶活没有带，可能蛋白量少，建议浓缩后再进行电泳，或者顺便做下western.

2.有带没有酶活，有目的蛋白带而无酶活的发酵液，使用镜检，酵母形态正常吗？
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5楼2012-07-16 08:31:48
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我爱倩
6楼2012-07-17 10:00:49
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tiandizao

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by hzlatqh at 2012-07-15 13:20:28
有酶活没蛋白：
1可能是有些蛋白表达量不高吧，所以SDSPAGE看不出来，但活性是有的。
2或者目标蛋白没有以预期大小表达出来，但酶活还是存在。可以做个western试试。

有蛋白没酶活：
1说明这个蛋白容易失活， ...

有条带但没有酶活这个，要确定是目的条带吗，还有你做的这给酶活是怎么确定的，实验条件都一样，做酶活实验时有没有先定量，蛋白量过高会不会有抑制作用
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不断的修正问题，改正错误中走向永恒
7楼2012-07-17 10:48:04
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jialemon

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by tiandizao at 2012-07-17 10:48:04
有条带但没有酶活这个，要确定是目的条带吗，还有你做的这给酶活是怎么确定的，实验条件都一样，做酶活实验时有没有先定量，蛋白量过高会不会有抑制作用...

现在问题基本解决了，可能是因为我测酶活时的酶液没有完全酶活，以至于测不到酶活，谢谢！
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8楼2012-07-27 19:43:50
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jialemon

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 84146922 at 2012-07-16 08:31:48
1.有酶活没有带，可能蛋白量少，建议浓缩后再进行电泳，或者顺便做下western.

2.有带没有酶活，有目的蛋白带而无酶活的发酵液，使用镜检，酵母形态正常吗？

问题已解决，谢谢！
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9楼2012-07-27 19:44:15
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jialemon

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by hzlatqh at 2012-07-15 13:20:28
有酶活没蛋白：
1可能是有些蛋白表达量不高吧，所以SDSPAGE看不出来，但活性是有的。
2或者目标蛋白没有以预期大小表达出来，但酶活还是存在。可以做个western试试。

有蛋白没酶活：
1说明这个蛋白容易失活， ...

问题解决了 非常感谢
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10楼2012-07-27 19:44:43
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