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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 毕赤表达，有些有酶活无蛋白，有些有蛋白没有酶活
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jialemon

新虫 (初入文坛)

[交流] 毕赤表达，有些有酶活无蛋白，有些有蛋白没有酶活 已有5人参与

最近用ppic9K和GS115做酶基因表达，挑取几个菌落做甲醇诱导表达，48h取样测酶活并跑SDS-PAGE，结果非常奇怪，有些没有酶活但又条带，但有些没有酶活却有目的蛋白条带，不过也有正常的（有酶活有条带）。有懂得能否指导一下，很纠结。
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1楼 2012-07-14 12:25:11
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84146922

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-16 13:40:02
1.有酶活没有带，可能蛋白量少，建议浓缩后再进行电泳，或者顺便做下western.

2.有带没有酶活，有目的蛋白带而无酶活的发酵液，使用镜检，酵母形态正常吗？
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5楼2012-07-16 08:31:48
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jialemon

新虫 (初入文坛)
肿么没有人回复呀，求救呀
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2楼2012-07-14 20:17:51
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waiter

木虫 (著名写手)

蛋白纯化系统（国产AKTA）销售


★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
帮忙顶了。顺便 请问你有km71h吗？
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3楼2012-07-15 11:30:25
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hzlatqh

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-07-16 13:39:49
有酶活没蛋白：
1可能是有些蛋白表达量不高吧，所以SDSPAGE看不出来，但活性是有的。
2或者目标蛋白没有以预期大小表达出来，但酶活还是存在。可以做个western试试。

有蛋白没酶活：
1说明这个蛋白容易失活，至少在你的试验条件下容易失活。
2可能蛋白活性需要某些辅酶，而异源表达情况下没有。。。
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jialemon
两个黄鹂鸣翠柳，一行白鹭上青天
4楼2012-07-15 13:20:28
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