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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 毕赤表达，有些有酶活无蛋白，有些有蛋白没有酶活
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jialemon

新虫 (初入文坛)

[交流] 毕赤表达，有些有酶活无蛋白，有些有蛋白没有酶活 已有5人参与

最近用ppic9K和GS115做酶基因表达，挑取几个菌落做甲醇诱导表达，48h取样测酶活并跑SDS-PAGE，结果非常奇怪，有些没有酶活但又条带，但有些没有酶活却有目的蛋白条带，不过也有正常的（有酶活有条带）。有懂得能否指导一下，很纠结。
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1楼 2012-07-14 12:25:11
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tiandizao

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by hzlatqh at 2012-07-15 13:20:28
有酶活没蛋白：
1可能是有些蛋白表达量不高吧，所以SDSPAGE看不出来，但活性是有的。
2或者目标蛋白没有以预期大小表达出来，但酶活还是存在。可以做个western试试。

有蛋白没酶活：
1说明这个蛋白容易失活， ...

有条带但没有酶活这个，要确定是目的条带吗，还有你做的这给酶活是怎么确定的，实验条件都一样，做酶活实验时有没有先定量，蛋白量过高会不会有抑制作用
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不断的修正问题，改正错误中走向永恒
7楼2012-07-17 10:48:04
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查看全部 11 个回答

jialemon

新虫 (初入文坛)
肿么没有人回复呀，求救呀
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2楼2012-07-14 20:17:51
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waiter

木虫 (著名写手)

蛋白纯化系统（国产AKTA）销售


★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
帮忙顶了。顺便 请问你有km71h吗？
赞一下 回复此楼
3楼2012-07-15 11:30:25
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hzlatqh

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-07-16 13:39:49
有酶活没蛋白：
1可能是有些蛋白表达量不高吧，所以SDSPAGE看不出来，但活性是有的。
2或者目标蛋白没有以预期大小表达出来，但酶活还是存在。可以做个western试试。

有蛋白没酶活：
1说明这个蛋白容易失活，至少在你的试验条件下容易失活。
2可能蛋白活性需要某些辅酶，而异源表达情况下没有。。。
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jialemon
两个黄鹂鸣翠柳，一行白鹭上青天
4楼2012-07-15 13:20:28
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查看全部 11 个回答
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